18高效液相色谱法解说.ppt

高效液相色谱法的分类 C、安培检测器 适用于：氧化还原活性的物质，如：胺、酚、羰基、巯基化合物 原理：电极施加恒电位，当电活性成分经过时，发生氧化还原反应，产生电流。 流速一定时， 与流动相中的浓度有关。 特点：灵敏度高，适合痕量物质检测 d、蒸发光散射检测器 用氮气流动相混合喷雾形成小液滴， 通过一个加热的腔体除去流动相，溶质的挥发性小于流动相，因此产生气溶胶，进入检测室 光照后，气溶胶发生光散射 散射光由光电倍增管检测 散射光强度与溶质的存在量呈比例关系 应用领域： 碳水化合物 油脂及脂肪酸 未衍生的氨基酸 制药行业 表面活性剂 天然产物 优点 缺点 不能使用不挥发性的流动相（例如：磷酸盐） 要求使用雾化气源（典型的是氮气） 不同的色谱条件下雾化及除溶剂的参数需要重新优化 蒸发出的溶剂要通到户外或通风橱里 对挥发性化合物的检测不理想 一般得到的是非线性校正曲线 某些化合物的检测灵敏度不如其他检测器 通用型 － 比流动相挥发性小的物质都能被检测 可以作梯度实验；检测下限可到纳克级水平 对环境条件不敏感；可以使用有强紫外吸收的溶剂作流动相 e. 示差折光检测器 除紫外检测器之外应用最多的检测器。 可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折射率差值。差值与浓度成正比。 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）。 灵敏度低，对温度敏感，不能用于梯度洗脱。 偏转式、反射式和干涉型三种。 应用范围： 碳水化合物、聚合物、脂肪酸及油脂类 f、色质联用 m/z +/- 电离源 质量分析器 MS： 质谱（Mass Spectrometry）是一种按照分子量及其电荷分离物质的技术，。 LC/MS：液相色谱与质谱的连用。 过程：除去HPLC的溶剂；产生离子；分离离子；检测离子；计算离子强度；处理数据 色质联用仪器 色谱 质谱 常用电离源：电子轰击源(EI)、电喷雾源(ESI)、大气压化学电离源(APCI) 、大气压光电离（APPI）、基质辅助电离（MALDI） 常用质量分析器：四级杆、离子阱、磁质谱、飞行时间质谱 常用检测器：电子倍增器、光电倍增器 电离源 1、电喷雾电离源（ESI） 电离源 2、大气压化学电离源（APCI）和大气压光电离（APPI） Molecular Weight Analyte Polarity very polar nonpolar 100,000 10,000 1,000 APCI ESI LC-MS的离子产生 200 300 400 500 600 700 800 m/z 529 527 233 489 543 APCI(-): 40V 100 200 300 400 500 m/z 57 97 147 219 278 515 530 EI 同一种物质在不同的离子源中，可能产生不同的带电离子，进而产生不同的信号。 APCI和ESI是液质联用常用的离子源，EI是气质联用常用的离子源。 0 20 40 60 80 100 120 Time [min] 0 200 Intens. mAU UV Chromatogram, 360 nm 0 20 40 60 80 100 120 Time [min] 0.0 0.5 1.0 7 x10 Intens. 总离子流图 液质联用数据示例：石墨电弧富勒烯产物分析 HPLC固定相 液－固吸附色谱固定相(吸附剂） 液—液分配色谱固定相 1、液—固色谱固定相 1.硅胶 　无定形多孔硅胶、球形全多孔硅胶、堆积硅珠 2.氧化铝 　⑴球形(5～10μm)；⑵无定形(5～10μm)。 3.高分子微孔多球(有机胶) 4.其它：⑴分子筛；⑵聚酰胺等。 固定相分类 涂渍（几乎不用） 化学键合相（常用） 键合反应：目前使用的化学键合相主要为硅氧烷（Si-O-Si-C)型键合，以氯硅烷与硅胶进行硅烷化反应制得。 以ODS为例： 化学键合相 一般键合相代号：YWG-C18H37 载体 键合基团 1、非极性键合相： C18柱(ODS)是最常用的非极性键合相。常用的还有C8柱、C1柱、苯基柱、芘基柱等。 2. 弱极性键合相：常见的有醚基键合相、二羟基键合相。 极性键合相：强极性－氨基键合相(分析糖类)；中强极性－氰基键合相。 化学键合相类型 硅胶键合C18柱填料 化学键合相一般用硅胶作载体，具有分配作用和一定的吸附作用。吸附作用的大小视覆盖度或含碳量而定。用化学反应方法将载体表面上残存的硅醇基除去，称为封尾，所形成的键合相称为封尾键合相，完全封尾的键合相无吸附作用，缺点是疏水强。 特点： 　①、化学稳定性好，使用过程不易流失，柱寿命长； 　②、均一性和重现性好 　③、柱效高，分离选