环氧化物水解酶固定化研究现状重点.pptxVIP

环氧化物水解酶固定化研究 现状 目录 Ⅰ. 环氧化物水解酶/来源 Ⅱ.固定化EH(酶/细胞)现状 Ⅲ.小结及展望 Ⅰ.环氧化物水解酶 环氧化物水解酶(epoxide hydrolase, EH, EC.3.3.2.3)是一种醚水解酶，属于α/β水解酶家族。该酶可用于催化外消旋环氧化物的对映选择性水解，获得高附加值的手性合成中间体—光学纯的环氧化物或者邻位二醇。 例： Ⅰ.环氧化物水解酶来源 细菌 Agrobacterium radiobacter 放射形土壤杆菌 Steinreiber, A. et al., 2001 De Vries et al., 2003 Archelas, A. et al., 2001 Orru, R. V. et al., 2001 Faber, K. et al., 1999 Rhodococcus sp. 红球菌 Corynebacteriuim sp. 棒状杆菌属 Mycobacterium paranicasm 分枝杆菌 Nocardia sp. 诺卡氏菌 Pseudomonas NRRLB-2994 假单胞菌 真菌 Aspergillus niger 黑曲霉 Weijers, C. A. et al., 1999Kim, H. S. et al., 2006 Yeates, C. A. et al., 2006 Helminthosporum sativum 小麦长蠕孢菌 Diploida gossypina — Beauveria sulfurescens 白僵菌 酵母菌 Rhodotorulla glutinis 粘红酵母 Kotik, M. et al., 2005 鱼类 Mugil cephalus — Sung Hee Choi. et al., 2010 绿豆 Phaseolus radiatus L. — Xu, W. et al., 2006 Ⅱ.固定化EH（酶/细胞）现状 2.1 吸附法 Kroutil等在研究来源于卡诺氏菌环氧化物水解酶固定化过程中，通过对比不同载体固定化酶活力回收发现，环氧化物水解酶吸附于DEAE-cellulose（二乙氨基乙基纤维素）上活力提高2倍以上。在固定化过程中混入非离子去垢剂（Triton X-100）可显著提高其热稳定性。(Kroutil et al., 1998) 2.1 吸附法—DEAE-cellulose 载体 酶/菌 酶活保留 热稳定性 重复 批次 底物 E From DEAE-cellulose 酶 90% — 4 2-(对-硝基苯基)环氧乙烷 减小 Karboune et al., 2010 225% 提高 5（55%） 1,2-环氧丁烷 微降 Kroutil et al., 1998 70% 下降 7（81%） 2-(对-硝基苯基)环氧乙烷 减小 Karboune et al., 2005 70% 微降 10（72.4%） 缩水甘油苯基醚 — 贾涛等，2008 65% 不变 — — — Karboune et al., 2001 文献阅读过程中发现，利用吸附法固定化环氧化物水解酶研究中大部分都采用了DEAE-cellulose为载体，故列表对比固定化后各参数值。 2.2 共价法—Eupergit C/Eupergit C 250L Yildirim等将环氧化物水解酶共价交联于环氧树脂Eupergit C 250L上（图1），使得其对环氧苯乙烯对映体选择性提高2.5倍左右、对环氧丙醇、环氧氯丙烷E均有提高，热稳定性、储藏稳定性亦显著提高（图2），操作稳定性表现为10个批次（活力保留95%、(S)-氧化苯乙烯ee99% ）。 (Yildirim et al., 2011；Yildirim et al., 2013 ) 图1 图2 2.2 共价法—Eupergit C/Eupergit C 250L Mateo等通过将环氧树脂Eupergit C进行改性（图），固定化过程即利用乙二胺或亚氨基二乙酸亲和攻击环氧树脂，接着中性PH下酶与载体共价结合，然后碱性条件下酶分子亲和官能团（氨基、巯基、羟基）与载体上其他环氧基团共价结合，最后添加小分子量的亲和试剂灭活未反应的环氧基团。 (Mateo et al., 2003) 2.2 共价法—Eupergit C/Eupergit C 250L 通过EDA（乙二胺）改性环氧树脂方法固定化环氧化物水解酶酶活保留均达到95%以上，热稳定性较游离酶有大幅提高，重复利用12批次(S)-氧化苯乙烯ee99%，酶活未见明显损失。 固 游 12 2.2 吸附共价法—改性环氧硅胶 Petri等将硅胶改性表面附带环氧基团后与来源于黑曲霉的环氧化物水解酶进行吸附共价连接，酶活保留达90%，最适T和PH均未变