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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2、基因枪法 花粉管 卵细胞 3、花粉管通道法 受精后 花粉管通道法就是在植物受粉后,花粉形成的花粉管还未愈合前,剪去柱头,然后,滴加DNA(含目的基因),使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 (三)将目的基因导入动物细胞 显微注射法 三、将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 将目的基因导入 微生物细胞 ——制备感受态细胞 四、目的基因的检测与鉴定 目的基因的部分片段 CGAACCGTAT 标记 探针 分子杂交技术:确定单链核酸碱基序列的技术。 基本原理是待测单链核酸与已知序列的单链核酸(探针)间通过碱基互补配对形成可检出的双螺旋片段。 ATCGAACCGTATCG TAGCTTGGCATAGC GAGACCTTAACGT C TC TGGAATTGCA CGAACCGTAT CGAACCGTAT TAGCTTGGCATAGC 标记 探针 (+) 阳性对照 (—)阴性对照 1 转基因个体的DNA(实验组) (+)(—) 1 :目的基因 :非转基因个体的DNA DNA分子杂交检测结果 蛋白质检测 蛋白质检测: 利用抗原-抗体杂交: 被检测物是蛋白质, “探针”是抗体 四、目的基因的检测与鉴定 存在与否 分子水平检测 分子杂交技术 抗原-抗体杂交 表达与否 mRNA 蛋白质 :DNA 四、目的基因的检测与鉴定 存在与否 分子水平检测 个体水平鉴定 分子杂交技术 抗原-抗体杂交 :检测性状及产品活性等 表达与否 mRNA 蛋白质 :DNA 棉花作为重要的经济作物,一直饱受棉铃虫的危害,造成巨大的经济损失。研究发现某种杆菌可以产生一种对抗此种害虫的蛋白质。利用基因工程的方法,我们如何改良棉花。请你提出基本方案。 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法等 目的基因的检测与鉴定 分子水平:DNA是否插入、转录、翻译 个体水平 深入思考: 1、PCR扩增之后,是否成功获得了目的基因,如何检测? —2000bp —1000bp —750bp —500bp —250bp —100bp 15000bp 10000bp 7500bp 5000bp 2500bp — 1000bp — 250bp — —11.2kb 酶切质粒载体电泳结果 PCR目的基因片段电泳结果 复制起始位点 标记基因 多个限制性内切酶酶切位点 EcoRⅠ EcoRⅠ SmaⅠ 2、所用的限制性内切酶如何选择? 3、如果目的基因是没有启动子和终止子,需要载体上带有,为了防止倒连可以如何操作呢? 4、如果目的基因两端没有合适的酶切位点,我们能通过什么方法给目的基因两端加上酶切位点呢? 5、如何提高目的基因与载体连接的比例?加大DNA连接酶的用量有用么? 分子杂交技术 根据碱基互补配对原则,把互补的双链DNA解开,把单股的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记,之后同被检测的DNA中的同源互补序列杂交,从而检出所要查明的DNA或基因。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 基因工程的基本操作程序 目的基因 开发人们特殊需要的基因,即目的基因(优良性状的基因、致病基因)。发达国家激烈竞争的焦点,有限的战略性资源,可申请新基因专利。 已获目的基因大致种类:与医药相关的基因;抗病、虫害和恶劣环境的基因;编码特殊营养价值的蛋白或多肽基因。 重组人胰岛素 (Humulin优泌林) 1982年10月全球第一个商业化基因重组人类胰岛素在美国上市 思考1: 如何利用大肠杆菌来生产重组人胰岛素? 1、从基因文库中提取(不知目的基因序列) 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 限制酶 与运载体连接 导入 基因组文库 部分基因文库(cDNA文库的构建) cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接 导入 某种生物某个时期的mRNA 基因组DNA文库 cDNA文库 基因组DNA文库与cDNA文库的比较 基因组文库与部分基因文库的关系 2、利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应,在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。 循环 变性 退火 延伸 能否根据
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