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2、将目的基因导入动物细胞 ①方法:显微注射法 ②程序: 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法等 目的基因的检测与鉴定 检测:是否插入、转录、翻译 鉴定: 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点:繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法: 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 四、目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 (一)、检测 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 (关键步骤) ①.首先取出转基因生物的基因组DNA ②.用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③.使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中 (1)方法: DNA分子杂交 (2)过程: 归纳步骤 (二)、鉴定(个体生物学水平) 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原抗体杂交 ②过程: 用上述探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA 归纳步骤 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交(注意与上不同之处) 抗原-抗体杂交 * * 1.2 基因工程的基本操作程序 原核细胞的基因结构(补充内容) 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不编码蛋白质。 :编码蛋白质 ,连续不间断 编码区 非编码区 原核细胞的 基因结构 ②调控遗传信息表达,上 游有启动子,下游有终止子 启动子 真核细胞的基因结构(补充内容) 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 真核细胞的 基因结构 编码区 非编码区 外显子:能编码蛋白质的序列 内含子:不能编码蛋白质的序列 :有调控作用,上游有启动子,下游有终止子 非编码序列: 包括非编码区和内含子 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 相同点 编码区是间隔的、_____的 编码区是 _____的 不同点 真核细胞 原核细胞 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 连续 不连续 编码区 非编码 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 有了目的基因,我们才能赋予一种生物以另一种生物的遗传特性。 使目的基因在受体细胞中稳定存在,并可进行遗传、表达和发挥作用 载体进入受体细胞稳定表达,才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。 才能确定目的基因是否真正在受体细胞中稳定遗传和正确表达。 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的基因 请举出三个以上的例子 (二)、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 请阅读P9第一和二两段 一、目的基因的获取 (一)从基因文库中直接获取 1.基因文库:概念见P9 2.基因文库的分类:按外源DNA片段的来源分类 种类 基因组DNA文库:含有一种生物的全部基因 部分基因文库:只包含了一种生物的部分基因, 如:cDNA文库 3.基因文库的目的 为了在不知目的基因序列的情况下,便于获得所需的目的基因。 4.获取目的基因的根据: 见课本P9 提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切 一定大小的DNA片段 将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 5.基因文库的构建方法之一(P10生物技术资料卡) (1)直接分离法(鸟枪法) 某种生物的单链mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 反(逆)转录酶 DNA聚合酶 反转录法:cDNA的合成流程图解 5.基因文库的构建方法之 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较 1、构建基因组DNA文库时,首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D
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