科研思路与方法新总结.ppt

正交设计为统计学设计多因素多水平设计，效率高。 举例通过正交设计筛选针灸阳经腧穴治疗脑梗死偏瘫的优化方案 妇炎净合剂组方镇痛作用的正交设计分析 案例：妇炎净合剂组方镇痛作用的正交设计分析 目的：分析妇炎净合剂中发挥镇痛效应的主要药物 方法：运用正交设计法，采用小鼠热板法镇痛试验，观察中药对小鼠的镇痛作用。 结果：药物香附、生蒲黄、红藤、蒲公英是复方中发挥镇痛作用的主要因素，其中以香附作用最为显著。 结论：理气化瘀药物在治疗慢性盆腔炎疼痛中起着主要作用，符合慢性盆腔炎瘀滞为主的病机和理气化瘀的治疗原则。 关键词 妇炎净合剂 热板法镇痛试验 正交设计 实验研究 材料：动物 雌性昆明种小鼠 160 只，8 周龄， 健康状况良好，体重 18～22g，由南京中医药大学实验动物中心提供。 使用许可证号：SYXK（苏）2000-0053。 药品 中药材均由南京市妇幼保健院中药部提供，每剂药均煎制浓缩为 100mL，由药剂科煎制质控。 分组与给药 将 160 只昆明种小鼠随机分成 16 组，按正交表组成新试验方给药，各组均按 30mL/kg 灌胃给药，每日1 次。 专业设计 实验方法 ：镇痛作用观察采用热板法。 将水浴槽加满水， 使水面接触热板， 调节恒温装置使水温控制在 （55±0.5）℃，加热后作为热刺激，用秒表记录小鼠自投入热板至出现舔后足的时间（S）作为该鼠的痛阈值。给药前先测定每只小鼠的痛阈值（共测 2 次，以平均值不超过 30 S 者为合格）。 于给药第 3 天后 1h，再测每只痛阈值。 统计学设计 药味组合的正交设计 妇炎净合剂共 12 味药， 我们将其中常用的药对作为一个因子，共形成 8 个因子， 取给药（1水平）和不给药（2 水平）两个水平，各药用量为原方妇炎净合剂含量，采用 L16（28）正交表，共组成 16 组配方。 药味组合的正交设计详见表 1。 常用实验动物 KM小鼠 Wistar大鼠 豚鼠 新西兰兔 比格犬 恒河猴 离体器官、活体组织、分泌物、体液为研究对象 应考虑取材条件、部位、新鲜度、保存、培养条件等 细胞 细胞有原生代和传代细胞 原代细胞的反应与人或动物反应相似，但不同个体差别较大。不稳定。 传代细胞反应稳定。但反应与人体和动物有区别。 二研究对象的条件 基本条件1.对处理因素敏感；2.对处理因素稳定。 如降压药的研究 分轻度高血压 药物往往敏感，但反应不稳定。重度高血压反应稳定但不敏感。中度高血压可以满足以上条件。 要求敏感、特异、稳定的研究对象进行试验是最理想的结果。 比如：动脉粥样硬化实验动物用家兔为宜， 过敏反应以豚鼠为好。 基因遗传试验研究对象以果蝇为好。 摩尔根研究遗传基因以果蝇为研究对象取得满意效果。果蝇繁殖周期短、染色体粗大易观察。 托马斯·亨特·摩尔根（Thomas Hunt Morgan，1866-1945） 不宜作一般临床科研的研究对象 1.存在影响结果的并发症； 2.危重状态； 3.多种治疗手段无效； 4.不能配合者； 三研究对象的纯化 即研究对象构成的均匀性、减少个体差异、提高样本的同质性。 如贫血：缺铁性贫血、巨细胞性贫血、溶血性贫血、恶性贫血。 研究对象纯化的标准与原则： 1.国际或国内统一的病或证型诊断标准、全国有关专业学术会议的规定、教科书的标准、多家医院或专家集体讨论制定的标准。 2.疾病确诊明确 3.病史明确 4.客观指标明确 冠心病疗效诊断应为缺血性心电图改变的冠心病而不是心前区不适病人。 5.病情不宜过重或过轻 6.既往史 首次心肌梗死；第二次、第三次心肌梗死的死亡率明显高于初次病人的死亡率。 影响因素的控制 1.针对研究目的选择合适的人群 不同性别年龄的人在激素、代谢与器官功能有差异，对疗效影响较大。一般选择中青年作为研究对象。疗效确定后扩展到儿童和老年人。 2.生活习惯与嗜好对结果的影响 吸烟可使PGI2合成减少，影响动脉粥样硬化和慢性阻塞性肺炎治疗效果；居住条件和家庭经济也影响疗效。 3.用药的种类、剂量、次数、服药时间 4.最好选择住院病人为研究对象 5.研究对象应与处理因素强度相结合 研究对象的依从性 配合度 处理因素 又称被试因素或施加因素 一处理因素的确定 分为处理因素和非处理因素 处理因素可以是研究对象本身相关的某些特征性别、年龄职业、遗传、心理等主因；也可是生物、化学、物理等外因。 对药物、治疗方法的疗效观察容易确定处理因素。对疾病病因的探讨防治措施效果相对难易确定，导致肺癌的因素200种、胃癌130、肝癌100种。 二处理因素的数目和水平 处理因素作用于研究对象引起的效应与水平有着依赖关系。比如药物