第七章分子生物学研究方法(上)资料.ppt

第七章 分子生物学研究方法 第一节 重组DNA技术回顾 一、重组DNA技术发展史上的重大事件 但是： 当时由于缺乏有效的分离和富集单一DNA分子的技术，科学家无法对这类物质进行直接的生化分析。随着DNA分子体外切割与连接技术及核苷酸序列分析技术的进步直接推动了重组DNA技术的产生与发展。 重组DNA技术（recombination）： ????? 是应用酶学方法，在体外将不同来源的DNA分子通过酶切、连接等操作重新组装成杂合分子，并使之在适当的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代DNA分子的过程。 二、基因克隆的载体 克隆用载体：是指具备自我复制能力的DNA分子。 常见的分子克隆载体有：病毒、噬菌体、质粒。 载体的功能 运送外源基因高效转入受体细胞 为外源基因提供复制能力或整合能力 为外源基因的扩增或表达提供必要的条件 三、基因克隆的操作 1、从复杂的生物有机体基因组中，经过酶切消化或PCR扩增等步骤，分离出带有目的基因的DNA片段； 带有负电荷的DNA或RNA核苷酸链，依靠无反应活性的稳定的介质（琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶）和缓冲液，在电场中以一定的迁移率从负极移向正极。根据核酸分子大小不同、构型的差异，以及所带电荷的不同，可以通过电泳将其混合物中的不同成分彼此分开。 （二）种类 1) 按凝胶材料分: 聚