第17章 荧光光谱析仪和原子光谱分析仪教学指导.docVIP

第十七章 荧光光谱分析仪和原子光谱分析仪 首 页 基本要求 重点难点 讲授学时 内容提要 1．基本要求 1.1掌 握 1.1.1掌握荧光分析的基本原理和荧光光谱仪的组成。 1.1.2掌握原子吸收分光光度计和原子发射光谱仪的基本原理和结构。 1.2 熟 悉 1.2.1熟悉荧光光谱仪的调试、使用及维护。 1.2.2熟悉原子吸收分光光度计的性能。 1.3 了 解 1.3.1了解荧光光谱仪的临床应用。 1.3.2了解原子光谱分析仪的临床应用。 2．重点难点 2.1重 点 荧光光谱仪的基本原理、基本结构、分类、调试及使用。 原子吸收分光光度计的基本原理、基本结构及使用。 2.2 难点 2.2.1荧光光谱仪的基本原理和基本结构。 2.2.2原子吸收分光光度计和原子发射光谱仪的异同。 3．讲授学时 建议学时学时λex。 荧光光谱：选择λex作激发光源，并固定强度，而让物质发射的荧光通过单色器分光，测定不同波长的荧光强度。以荧光波长作横坐标，荧光强度为纵坐标作图，便得荧光光谱。荧光光谱中荧光强度最强的波长为 λem 。 荧光物质的最大激发波长（λex）和最大荧光波长（λem）是鉴定物质的根据，也是定量测定中所选用的最灵敏的波长。 4.1.3 荧光光谱仪的工作原理和主要结构 对于某一荧光物质的稀溶液，在激发光的频率、强度以及液层厚度不变时，此荧光物质所发出的荧光强度与溶液的浓度成正比关系。由此可以通过测定荧光强度来求出该物质的含量。荧光分析法和紫外、原子吸收分析方法有本质的不同。它所测量的是待测物质所发射的荧光强弱，而不是物质对光谱的吸收强弱，属于发射光谱分析。 荧光分光光度计的结构包括五个基本部分：①?激光光源：用来激发样品中荧光分子产生荧光。常用汞弧灯、氢弧灯及氘灯等，目前荧光分光光度计以用氘灯为多。②?单色器：用来分离出所需要的单色光。仪器中具有两个单色器，一是激发单色器，用于选择激发光波长；二是发射单色器，用于选择发射到检测器上的荧光波长。③?样品池：放置测试样品，用石英做成。④检测器：作用是接受光信号，并将其转变为电信号。⑤记录显示系统：检测器出来的电信号经过放大器放大后，由记录仪记录下来，并可数字显示和打印。 4.1.4荧光光谱仪的应用 荧光光谱仪的主要用途包括：①常规分析（如定性和定量分析、化学表征、色谱流出物的检测等）；②获得分子信息（如测量分子内间距、决定键合平衡、研究结构变化等）；③用于医药研究（如何研究膜结构和功能、确定抗体的形态、研究生物分子的异质性、评价药物的相互作用、确定酶的活性和反应、荧光免疫分析、监测体内化学过程等）；④环境监测（如水和空气中污染物的鉴别和计量）等。 4.2 原子光谱分析仪 4.2.1 原子光谱分析仪原子光谱分析仪有原子光谱分析仪主要有原子吸收光谱仪原子发射光谱仪和原子荧光光谱仪。结构原理与普通的分光光度计是相似的，只是用锐线光源代替了连续光源，用原子化器代替通常的吸收池。空心阴极灯或无极放电灯发生相应待测元素特征波长的射线，它穿过火焰，把试样的溶液以细粒子流的形式喷射到火焰上，部分射线被吸收。这一部分正比于试样的浓度，测量吸收量将其与标准溶液进行对比，从而确定浓度。原子吸收光谱仪基本结构由光源、原子化器、分光系统及检测系统四个主要部件组成空心阴极灯、蒸气放电灯原子化器作用是将试样中的待测元素转变成原子态的蒸气。常用的有火焰原子化器和无火焰原子化器两种。分光系统作用是将所需要的共振吸收线分离出来。分光系统的关键部件是色散元件，可以是棱镜或衍射光栅。检测系统是将接收到的光信号转变成电信号，然后再经同步检波放大器放大，同时把接收到的非被测信号滤掉。放大了的被测信号进入对数变换器进行对数变换，变成线性信号，在指示仪表上显示出来。原子吸收光谱仪的性能包括波长精度、分辨率对某个元素的特征浓度和检出限等。 原子发射光谱仪原子发射光谱法是根据处于激发态的待测元素原子回到基态时发射的特征谱线对待测元素进行分析的方法。气态离子或分子受热或电激发时会发生紫外和可见光域内的特征辐射。发射光谱就是提供足够能量的光源，使试样蒸发并将各组分转变成气态原子或离子，然后引起气体中各基本粒子的电激发，被激发的原子或离子回到基态时发射出每个元素的特征谱线，研究特征谱线的波长和强度就可以对被测试样进行定性和定量分析。由于待测元素原子的能级结构不同，因此发射谱线的特征不同，据此可对样品进行定性分析；而根据待测元素原子的浓度不同，因此发射强度不同，可实现元素的定量测有许多种激发方式可以激发光谱，最新技术常用的是火花式与ICP两种方式利用试样中原子或离子所发射的特征谱线的波长或度来检测元素的存在和含量的原子发射光谱仪。主要有火焰光度计、火焰分光光度计、摄谱仪、光电直读光谱仪和激