人工基因组的设计与合成-复习课.pptx

人工基因组的设计与合成;1 核酸与基因 2 基因表达与调控 3 现代生物技术 4 人工合成酵母染色体;DNA是遗传物质，而蛋白质不是遗传物质。 核酸的化学组成 核酸的基本组成单位 ——核苷酸 DNA结构特点 ;Watson 和 Crick 于1953年提出了DNA 双螺旋结构模型，说明了DNA 的二级结构。（即B型DNA）;DNA双螺旋结构模型要点（1）;;疏水的碱基位于双螺旋的内侧，亲水的磷酸和脱氧核糖基位于螺旋外侧。碱基平面与螺旋轴垂直，脱氧核糖平面和碱基与中心轴平行。由于几何形状的限制，碱基对只能由嘌呤和嘧啶配对，即A与T，G与C。这种配对关系，称为碱基互补。;; A和T之间形成两个氢键，G与C之间形成三个氢键。;DNA双螺旋结构模型要点（3）;DNA双螺旋结构模型要点（4）;DNA双螺旋结构模型要点（5）;中心法则;特点一：DNA的半保留复制;;DNA半保留复制图示：;特点二：DNA的复制是半不连续的;解链方向;转录 (transcription) 以DNA的一条链为模板合成一条互补的RNA的过程 。 ;不对称转录(asymmetric transcription)： 在DNA分子双链上某一区段，一股链用作模板指引转录，另一股链不转录 。;编码链(coding strand)：与模板链相对应的互补链，其编码区的碱基序列与mRNA的密码序列相同（仅T、U互换），也称作Crick（C）链（Crick strand）、正（+）链(plus strand)，或有意义链(sense strand)。;转录的四个阶段;蛋白质生物合成的概念;翻译——肽链的生物合成过程 从mRNA的起始密码子AUG开始，按5ˊ→3ˊ方向逐一读码，直至终止密码子。于是，合成中的肽链从起始甲硫氨酸开始，从N端→C端延长，直至终止密码子前一位密码子所编码的氨基酸。 ;遗传密码的特点;2. 连续性(non-punctuated);3. 简并性(degenerate);4. 通用性(universal);5. 摆动性(wobble);6.遗传密码的偏爱性（bias or preference); 基因：指携带有遗传信息的DNA或RNA序列，是控制性状的基本遗传单位。 在细菌中，是指编码一个分立的蛋白质或RNA分子的遗传功能单位 在真核细胞中，是指编码一个或者多个产物的，或者对某一个产物产生有贡献的一个转录单位。;基因表达(gene expression) 是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。对这个过程的调节就称为基因表达调控（gene regulation或gene control）。基因表达调控是现阶段分子生物学研究的中心课题。 rRNA、tRNA编码基因转录生成RNA的过程也属于基因表达。 \ ;原核基因表达调控 ① 转录水平上的调控； ② 转录后水平上的调控： mRNA加工成熟水平上的调控 ； 翻译水平上的调控 。;操纵子组成;启动子;操纵基因（Operator）;乳糖操纵子 lac operon;乳糖操纵子的作用机制;真核生物基因表达调控的层次 1、DNA水平调节 2、 转录水平调节 3、转录后水平的调节 4、翻译水平调节 5、翻译后加工的调节 ; 转录因子DNA结合域 几种常见基序 锌指(zinc finger) 螺旋-转角-螺旋 (helix- turn- helix) 二聚体结构域： 螺旋-环-螺旋 (helix- loop- helix，HLH ) 亮氨酸拉链 (Leucine zipper) ;锌指(zinc finger) C2H2型：由肽链的保守序列中的一对组氨酸和一对半胱氨酸(His2／Cys2)与锌离子形成一个四面体结构 有两条β链和一个α螺旋， α螺旋区域上含有保守的碱性氨基酸，负责与DNA结合 如TFIIIA、与GC盒结合的SPl;C4型： 2对半胱氨酸(cys2／cys2)与一个锌离子形成配位键， 如类固醇激素受体家族 ;;螺旋-转角-螺旋 (helix- turn- helix) ;亮氨酸拉链 (Leucine zipper);调控类型与特点;DNA??组技术;3.1.1 质粒; 质粒作为分子生物学工具载体的基本条件 具有独立复制能力 具备多个限制酶的识别位点(多克隆位点) 具有遗传表型或筛选标记 有足够的容量以容纳外源DNA片段 可导入受体细胞。;3.1.1 质粒;抗药性标志的选择;;4.1 酿酒酵母及酵母基因组特点 4.2 人工设计基因组原则 4.3 人工合成方法 4.4 替换天然染色体的方法;人工设计基因组原则;4.3 Build-A-Genome;4