体外抗体形成细胞.ppt

体外抗体形成细胞检查 医学免疫学教研室 实验目的 掌握小鼠脾细胞的制备方法。 了解体外抗体形成细胞的检查。 实验原理 将一定量洗涤过的绵羊红细胞静脉或腹腔注射小鼠，注射后4天将小鼠杀死，制成脾细胞悬液，内含抗体形成细胞（PFC）. 将脾细胞、绵羊红细胞及补体混合孵育，由于PFC分泌的抗体与绵羊红细胞（抗原）结合形成IC，激活补体，可形成肉眼可见的空斑。 是机体免疫状态的指标。特异性高，简单，好观察。 实验材料 载玻片、双面胶制备的小室。 绵羊红细胞 补体（豚鼠血清） 细胞营养液（1640） 微量加样器 PH=7.2的PBS 小平皿 实验方法——免疫小鼠 5%的SRBC0.1mL注射小鼠腹腔，4天后处死。 实验方法——制备脾细胞悬液： 取出脾脏，用1支5mL和1支2mL注射器在含有2mL PBS的小平皿中刮出脾细胞。 用2mL注射器抽吸刮出的脾细胞3-5次，使脾细胞尽量分散。 用约8mLPBS洗涤脾细胞3次；每次1000转，10分钟。 最后将沉淀细胞悬浮于1mL1640液中。 细胞计数，配成2-3×107/mL，备用。 实验方法——补体制备 豚鼠心脏取血，分离血清。稀释成1：8，备用。 实验方法——SRBC制备 取羊颈静脉血，生理盐水洗涤3次，制备成25%的羊血备用。 试验方法——制备PFC 取脾细胞50μL，SRBC 50μL，补体50μL混合，用1640补充到500μL，混合均匀。 微量加样器将混合液注入事先制备好的小室中。每室约100μL，37°C的温箱中1-2小时，观察结果。可借助显微镜观察。 * * *