第十五章遗传病的预防.pptVIP

细胞器的活体染色 活体染色 实验原理 1.活体染色 活体染色：是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色，但对该样品又没有毒害作用的一种染色方法。 目的：既显示活体细胞内的某些结构,又不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 应用： 活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理,病理状态。 教学目的 掌握细胞内线粒体、液泡系等细胞器的活体染色方法 掌握光镜下线粒体、液泡系、高尔基复合体等细胞器的基本形态和他们在细胞内的分布 实验内容 兔子肝脏细胞的线粒体超活体染色 蟾蜍软骨细胞液泡系超活体染色 观察高尔基体 实验用品 仪器，用具：光学显微镜、载玻片、盖玻片、吸管、小镊子、吸水纸、手术器材一套、解剖盘、小平皿 。 材料：兔子、蟾蜍 试剂：1/300詹纳斯绿B染液；1/3000中性红染液；兔子Ringer液；蟾蜍Ringer液 一、兔子肝脏细胞的线粒体超活体染色 原理 碱性染料詹姆斯绿B是线粒体的专一活性染料。 其中线粒体内膜和嵴膜上的细胞色素氧化酶可以使该染料始终处于氧化状态而曾蓝色，而线粒体周围细胞质中的詹姆斯绿B则被还原成无色，与中性红使用，进行双重超活体染色时，能使线粒体显得更清楚。 线粒体在光镜下常呈颗粒状、棒状或弯曲的线状，其形态和数量随不同生物、不同组织及不同生理状态而发生变化 一、兔子肝脏细胞的线粒体超活体染色实验步骤 取材：空气栓塞法处死兔子，立即剖腹取出肝脏，切取肝脏边缘较薄的肝组织一小块。 染色：放入盛有兔子Ringer氏液的平皿内洗去血液(用镊子轻压)，然后轻放到载玻片上。滴加詹纳斯绿B染液几滴，注意染液不要太多，要使肝组织的上半部分暴露在空气中，而不可使组织块完全淹没，这样细胞内线粒体的酶系可被充分氧化而使线粒体易于着色。染色处理的时间一般在30分钟左右，当组织块的边缘已染成蓝绿色时即可。 分离细胞：染色后，用镊子将组织块拉碎分离细胞，去掉稍大的组织块，使分离下来的细胞留在载玻片上，加一滴兔用的Ringer液，盖上盖玻片，吸去多余水分。 镜检：在油镜上可见肝细胞中的线粒体被染成蓝绿色，呈线条状或颗粒状，在细胞核周围分布较多。 镜 检 二、蟾蜍软骨细胞液泡系超活体染色 原理：动物细胞内，凡是由膜所包围的小泡和液泡除线粒体外都属于液泡系，包括高尔基器、溶酶体、微体、消化泡、自噬小体、残体、胞饮液泡和吞噬泡，都是由一层单位膜包围而成。 但动物细胞内液泡系很小，不经过活体染色很难显示出来。 软骨细胞内含有较多的粗面内质网和发达的高尔基复合体，能合成与分泌软骨粘蛋白及胶原纤维等，因而液泡系发达。中性红是液泡系特殊的活体染色剂，只将液泡系染成红色，在细胞处于生活状态时，细胞质及核不被染色，中性红染色可能与液泡中的蛋白有关。 蟾蜍软骨细胞液泡系超活体染色实验步骤 取材：取一只蟾蜍，捣髓法处死，剪开胸腔，取胸骨剑突软骨最薄部分的一小片，放在载片上。 染色：滴两滴1／3000中性红染液，染色15分钟，用吸水纸吸去染液，加一滴鼠的0.65%Ringer氏液，盖上盖片，吸去多余Ringer氏液。 镜检：显微镜下观察，可见软骨细胞椭圆形，细胞核周围有许多染成玫瑰红色． 小不一的小泡，即软骨细胞液泡系。 三、高尔基复合体的观察 取兔脊神经节横切片，先用低倍镜观察，兔脊神经节的切面呈椭圆形，染成黄色，在脊神经节内有大量圆形的神经细胞。 高倍镜观察，神经细胞的切面呈椭圆形，中央有一圆形透明的部分是细胞核的位置，在细胞核周围的细胞质里（染成黄色），分散着许多染成黑褐色的点状、棒状或卷曲的线状结构，这就是高尔基体。 作 业 绘制2-3个兔肝脏细胞的线粒体图 绘制2-3个蟾蜍软骨细胞的液泡系兔 绘制1个兔子脊神经节细胞的高尔基复合体图 * * 洪玉制作 体内活体染色 体外活体染色（超活染色） 活体染色 超活染色：将活的动、植物分离出部分细胞或组织小块,以染料溶液浸染,染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 剑状软骨 蟾蜍取材部位 细胞核 高尔基体 核仁 高尔基体的观察