发酵工程实验 讲义 2015.ppt

配置时，量筒定量； 发酵摇瓶（规格250ml），装液量30ml；3L发酵罐 2L； 发酵促进剂难溶于水且不影响pH，故先称量0.3g于摇瓶中； 甘油及K2HPO4用烧杯称量，酵母膏等用称量纸称量； 发酵罐的发酵培养基另加消泡剂：0.01g/100ml。(调整pH后再加) 实验操作—发酵液指标测定 pH：发酵罐在线测定，或者发酵液用pH计测定。 生物量（DCW）：2ml离心管取2ml发酵液，4℃下10000rpm离心3min，上清用来测定酶活，沉淀用Tris-Hcl复溶重悬，再次离心，后重复一次操作，沉淀烘干至恒重（离心管事先编号，在烘箱80℃烘干过夜，拿出到干燥器中冷却，后用镊子拿取，电子天平上称量，记录重量）； 酶活（MTG）； 甘油含量 TG酶的测定 试剂： 底物溶液：12.11 gTris，3.475 g盐酸羟胺，1.536 g还原型谷胱甘肽，5.06 gCBZ-Gln-Gly，调至pH 6.0后定容至500 ml，过滤。 终止溶液（显色溶液）：各配制3 mol/l盐酸溶液，5 %三氯化铁，12 %三氯乙酸500 ml，三者等体积混匀后过滤。 发酵液酶活的检测 1.待测样品用蒸馏水稀释合适的倍数。 2. 分别取待测样品0.15 ml于试管中，准确加入1.5 ml底物溶液于各试管，振荡混合均匀，37℃水浴10 min。 3. 加入1.5 ml