四川大学基因工程原理张正义教授上课ppt.ppt

分子克隆工具酶及其应用 分子克隆工具酶及其应用 限制性内切酶—主要用于DNA分子的特异切割 DNA甲基化酶—用于DNA分子的甲基化 核酸酶—用于DNA和RNA的非特异性切割 核酸聚合酶—用于DNA和RNA的合成 核酸连接酶—用于DNA和RNA的连接 核酸末端修饰酶—用于DNA和RNA的末端修饰 其它酶类--用于生物细胞的破壁、转化、核酸纯化、检测等。 第一节 限制性内切核酸酶 5P P5 3HO OH3 核酸酶Bal31的活性 四. 核酸酶S1 1.?一般特点：糖蛋白(含糖量8%)，最佳pH 4.5， 对热稳定，抗变性剂 2.?催化反应类型: ss-DNA; ss-RNA; 双螺旋变性区 3.?用途 1) 基因突变--缺失，常与外切酶，如ExoIII、λ外切酶、Bal31连用 2) DNA定序分析 3) S1作图法 4) 基因结构分析 5) tRNA结构分析 4.?使用注意事项 1) 避免长时间反应，因最适酸性pH将导致DNA断裂或降解 2) 避免使用高浓度酶量，以免DNA被降解(因产生切口) ExoIII S1 S1 S1 S1 S1 S1 Poly(A) Poly(A) 5 5 5 5 5 5 核酸酶S1活性