动物组织RNA提取及荧光定量PCR 精讲.ppt

Sybr? Green I 是一种dsDNA的内插化学染料，它能够嵌入到双链DNA中并发出强烈荧光。当它没有结合上双链DNA时，只发出相当弱的荧光；当它一旦插入到双链DNA里时，荧光信号就会强烈地增加，并且其荧光强度的增加与dsDNA 的数量成正比。因此可根据荧光信号的增强来计算PCR扩增产物量的增加。 SYBR Green I 的最大吸收波长约为 497nm ，发射波长最大约为 520nm power sybr green,高灵敏度，可以检测低至2个拷贝数量的靶基因 * * * 探针与模板是特异性结合 ； 5’端标记荧光分子，3’端标记荧光淬灭分子，探针完整的时候，荧光基团发射的荧光被淬灭基团吸收，检测不到荧光信号； 利用Taq酶的5`→3`外切核酸酶活性，在PCR反应进行过程中，切断探针，产生荧光信号，信号的强度就代表了模板DNA的拷贝数。 每形成一个DNA双链，就会有相应数量的荧光染料结合 荧光染料与双链DNA一结合，产生荧光信号 荧光信号强度与DNA分子数成正比 * RNA提取及Q-PCR相关技术 主讲：宋志新 利用含有变性剂和Rnase抑制剂的有机溶剂提取RNA，是目前常用的RNA提取方法。 Trizol（主要成分为异硫氰酸胍和酚），具有极强的裂解能力，可在短时间内裂解细胞和组织样本，保持样品中RNA的完整性，有效抑制RNA的降解。样品在Total RNA Ext