《DNA重组技术的基本工具》(课件).pptVIP

G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 “分子缝合针” : DNA连接酶 ⒈ 分类： ⑴ E·coli DNA连接酶 ⑵ T4 DNA连接酶 ⒉ 作用： 二、“分子缝合针” —— DNA连接酶 E·coli DNA连接酶　　　　或T4DNA连接酶 E·coli DNA连接酶　　　　或T4DNA连接酶 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， E·coli DNA连接酶　　　　或T4DNA连接酶 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 　 　　T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低 　　DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ A T G C T C G A A 　　DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ A T G C A T C G A A 　　DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ DNA聚合酶 　　DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？ 不是一回事。 不同点：1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2） DNA聚合酶需要以一条DNA链为模板；而DNA连接酶不需要模板。 相同点：形成磷酸二酯键 三、“分子运输车” 　　　——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 三、“分子运输车” 　　　——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 　　作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 三、“分子运输车” 　　　——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： ⑴有1~多个限制酶切点 　　作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 三、“分子运输车” 　　　——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： ⑴有1~多个限制酶切点 　　作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　　霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 三、“分子运输车” 　　　——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： ⑴有1~多个限制酶切点 ⑵对受体细胞无害 　　作为分子运输车——载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　　霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ 　　假如目的基因导入受体细胞后不能复制或不能转录，转基因生物能有预想的效果吗？ ⑶导入基因能在受体细胞中复制、表达 　　假如目的基因导入受体细胞后不能