第六章植物愈伤组织培养.pptVIP

第三节 愈伤组织培养条件与定向变异 ? ? ? ? 植物愈伤组织的培养条件 不同用途愈伤组织的定向诱导 愈伤组织的形态发生方式 愈伤组织培养的具体过程 一、植物愈伤组织的培养条件 1、外植体 不同基因型或同一植株不同部位的细胞外植体在 离体培养中的反应可能不同： ① 材料的基因型对愈伤组织的器官分化有决定性 的影响。 不同植物种的器官分化明显不同，如烟草、胡萝 卜和矮牵牛等植物容易诱导器官形成，而禾谷类、 豆类、棉花等就比较困难。 ② 通常同一种植物的不同器官或组织所形成的愈 伤组织，在生理和形态上的差别都不大，但有些植 物情况不同。 1、外植体 ③ 年龄较幼的外植体，不仅易于诱导形成愈伤组 织，而且也容易诱导分化成植株。 如油菜植株的自下而上的茎段培养结果表明， 下部的器官形成频率低，越往上部，苗的分化频率 越高。年龄也有明显影响，年龄越老，当转移到分 化培养基上生长时，其苗分化频率越低。 因此在组织培养中，要及时转移已形成的愈伤 组织进行分化培养，可大大提高苗的分化频率。 2、培养基 培养基的各种成分及物理性质，都对愈伤 组织的培养和器官发生产生一定影响，但起决 定作用的仍然是植物生长调节剂，特别是生长 素和细胞分裂素的配比。 生长调节剂 细胞分裂素和生长素的比例是控制芽和根形成 的重要条件之一。细胞分裂素和生长素的比例高 时，有利于芽的形成；而比例低时，有利于根的 诱导。这样通过变换激素的种类、浓度和配比， 即可有效地调节培养组织的器官分化。 不同种类的生长素和细胞分裂素，对生根和长 芽的效果是不同的。 无机营养元素 在植物组织培养中与整体植物一样，细胞的生长 也要求满足植物生长的必需元素，若完全缺乏或过 多或不足，也会影响细胞生长和分化。不过其影响 不如激素明显。 各种类型的植物、器官所需要的每种元素的量， 特别是大量元素是有区别的。如生根培养要求无机 离子浓度小一些，所以常用1/2MS或White培养基。 如有些植物要求的氮，以硝酸态形式供应为佳，而 有些植物要求的氮，以铵态氮的形式供应为佳。 有机成分 在培养基中加了糖、硫胺素、烟酸、吡哆素、肌醇和 甘氨酸等，可以满足愈伤组织的生长和分化的要求。糖 不仅可作为碳源，而且也是培养基渗透调节剂。各种氨 基酸和生物活性物质，可以促进愈伤组织生长和向器官 分化。在组织培养过程中加一些植物器官的汁液，也常 常产生良好的效应。 物理性质 培养基的物理性质 (固体状态或液体状态，渗透压和pH 值)对形态发生有明显的影响。 在胡萝卜和石刁柏的培养过程中，需要改变培养基的形 式，才能顺利地分化出苗。其方法是： 第一阶段诱导形成愈伤组织，应在固体琼脂培养基上进行培养； 第二阶段细胞和胚状体的增殖，需在液体培养基中完成； 第三阶段由胚状体发育成可移植的植株，又应转移到固体琼脂培 养基上进行培养。 培养基的渗透压对细胞增殖和胚状体的形成有明显的影响。 3、培养环境条件 (1)光照 在离体无菌培养条件下，光照对器官的作 用主要是一种诱导反应，因为培养基中己有足够的碳 源供利用，这时细胞处在异养条件下，不需要光合作 用。一定的光照对小苗的形成、根的发生、枝的分化 和胚状体的形成有促进作用。 (2)温度 在组织培养中，一般都采用22～25℃的恒 温条件进行外植体的培养。对一般植物来讲，都可较 好地形成芽和根。 二、不同用途愈伤组织的定向诱导 松脆的愈伤组织生长旺盛，色泽鲜艳，是进行悬浮 培养最适合的材料，稍经机械振荡，即可使组织分散 成单细胞或少数几个细胞组成的小细胞团，在培养中 细胞迅速增殖。 坚实的愈伤组织中的细胞间被果胶质紧紧地粘着， 因而结构致密，生长较慢，往往不能形成良好的悬浮 系统，但容易分化成苗。 这两类愈伤组织可互相转变，加入高浓度的生长物 质，可使坚实的变松脆，减低或除去生长物质，松脆 的可转变为坚实的。 影响愈伤组织之间转变的控制因子 1、植物激素 生长素是促使细胞进入松脆状态的因子，细胞分裂 素是促使细胞进入坚实状态的因子。 2、氮源形态 氨态氮（或谷氨酰胺、精氨酸、水解酪蛋白等有机 形式的还原态氮）可起到促进分裂的作用；硝态氮具 有抑制细胞分裂的作用。 三、愈伤组织的形态发生方式 脱分化后的细胞进行再分化的过程有两种方式： 器官发生方式 胚胎发生方式 1、器官发生方式 指细胞或愈伤组织培养物，通过形成不定芽再生成植 株，这是细胞和组织培养中常见的器官发生方式。 * 第六章 植物愈伤组织培养 本章主要内容 ? 植物愈伤组织及形成过程 ? 植物愈伤组织与遗传变异 ? 植物愈伤组织培养条件与定向变异 第一节 植物愈伤组织及形成过程 ? 植物愈伤组织的概念 ? 植物愈伤组织的形态结构 ? 植物愈伤组织的形成