纸色谱和平板电泳-(第五讲)资料.pptx

纸层析分离技术 Paper Chromatography ;目录;原理：根据溶质A在流动相与固定相（纸纤维中吸着的水分）中的分配系数不同，流动相因毛细现象沿纸上升，KD大的前进慢，KD小的上升快，因而溶质得到分离。 ;4;氨基酸的Rf值;3. 温度的影响;三. 纸色谱法的基本操作 3.1 纸的准备 3.2 点样 3.3 展开 3.4 显色及定位 3.5 定量 ;3.1 纸的准备;层析纸按需要剪裁成长条形（或筒型）;3.3 展开;11;3.4 显色及定位;13;3.5 定量;2 直接测定法;c 仪器测定法 ;四. 应用举例 ;(一)??? 分离和分光光度法测定氯原酸; 2 实验部分;3．? 结果与讨论：;(二)贵金属元素的反相纸色谱分离研究;?(三) 用纸色谱法测定岩石及矿物中金、锑、硒、砷、铊（铋）;?(三) 用纸色谱法测定岩石及矿物中金、锑、硒、砷、铊（铋）;2015/3/30;一、概述 二、电泳分类 三、凝胶电泳 ;1 概述;1.2 蛋白质电泳的分离蛋白质的依据 不同的蛋白质分子，由于其侧链可解离基团的种类和数量、分子质量、空间三维结构都有所不同，所以： 等电点（pI）不同 同一pH条件，所带电荷种类、数量不同 大小、形状不同 ;蛋白质分子在电场中的泳动速度常常用迁移率来表示 定义：蛋白质分子在单位电场强度下的泳动速度 m = = V=迁移速度； E=电场强度； η=介质粘度 在同一介质中电泳，m只与蛋白分子自身大小和形状（r）、所带电荷数量（Q）相关 利用蛋白质混合物中各蛋白的迁移率不同（蛋白性质差异造成），而达到分离的效果;6种蛋白质混合物的电泳结果图;1.4.迁移率及其影响因素;1.4.1 影响迁移率的内在因素;质粒DNA的构象;1.4.2 影响迁移率的外界因素;①电场强度;②溶液的pH值 ;③溶液的离子强度;④温度的影响;⑤支持物的影响;⑥电渗;二、电泳的分类;凝胶电泳：由琼脂、琼脂糖、淀粉胶及聚丙烯酰胺等物质作支持物的电泳。 特点： 1.可以制成非常均匀的凝胶，带电质点在凝 胶的孔中泳动。 2.电泳操作方法简便，电泳速度快 3.分辨率高，重复性好，电泳图谱清晰。 4.适用于生化，免疫等定性定量测定 ;1 琼脂糖凝胶电泳; 1.2 琼脂糖简介;聚丙烯酰胺凝胶 单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N，N，N?，N?—四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE)。;聚丙烯酰胺凝胶有下列特性： (1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好； (2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶； (3)对pH和温度变化较稳定； (4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好； (5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可达10-6g (6)凝胶孔径可调节，根据被分离物的分子量选择合适的浓度，通过改变单体及交联剂的浓度调节凝胶的孔径； (7)分辨率高，尤其在不连续凝胶电泳中，集浓缩、分子筛和电荷效应为一体。因而较醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳等有更高的分辨率。;按凝胶装置分为盘状电泳（图1）及板状电泳（图2） 盘状电泳通常是不连续系统，利用缓冲液离子成分、pH、凝胶孔径进行电泳，带电颗粒电泳时具有电荷效应、分子筛效应、 浓缩效应。;图1 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳示意图(A为正面,B为剖面)(1)样品胶pH6.7 (2)浓缩胶pH6.7 (3)分离胶pH8.9 (4)电极缓冲液pH8.3;图2 夹心垂直板电泳槽示意图 图3 凝胶模示意图1.导线接头 2.下贮槽 3.凹形橡胶框 4.样品槽模板 5.固定螺丝 6.上贮槽 7.冷凝系统 ;SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS） ： 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。因此可以利用SDS测定蛋白质分子量。;实验步骤 1.