荧光细胞化学测定.ppt

——2014级生物科学 张静文 实验目的 学习荧光显微镜的使用 了解荧光显微技术原理和方法 荧光技术在细胞化学方面的应用 测定细胞活力 细胞活力的测定 评估细胞生长状况 实验原理 荧光显微镜 ：荧光显微镜是以紫外线为光源， 用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜 下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于 研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及 定位等。 荧光又可分为：自发荧光和次生荧光。自发荧光是指有些 生物体受到短波光照射后，直接发出的荧光。如经紫外光照射 后，叶绿体发出的红色荧光；木质素发出的黄色荧光等。次生 荧光是指有些生物材料受到短波光照射后并不发光，但当它吸 附荧光染料后，也同样产生荧光，这种荧光也称间接荧光。 作为荧光的激发光源可分别采用紫外，紫、蓝、绿等波段 的光；而获得的荧光为紫、蓝、绿、黄、橙、红等波段的光。 不同生理活性的细胞，发射荧光(或次生荧光)的能力有很大差 别，不同组份对荧光染料反应产生的荧光颜色也不同，所以利 用这一特性，通过荧光显微镜可以测定某些组分的含量以及细 胞的生理活性。 实验用品 1.材料：洋葱，新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆原生质体悬液，人 口腔上皮细胞 2.用品：荧光显微镜，载玻片，镊子，烧杯，盖玻片，牙签 3.试剂： 荧光染料 激发光源 应用范围 显色 吖啶橙 蓝光 细胞核 细胞核绿色 荧光增白剂 蓝紫光 植物细胞壁 细胞壁黄绿色 二丙酸酯荧光素 蓝紫光 细胞酯酶 活细胞质呈黄绿色 异硫氰酯荧光素 蓝光 蛋白质 绿色 罗丹明 绿光 线粒体 黄绿色  实验步骤(一)利用荧光增白剂观察植物细胞壁 DNA分布的观察 蛋白质分布的观察 线粒体观察 吖啶橙鉴定细胞死活 （二）分解酶的活性及细胞活性的测定 1.取少许新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆表皮放在玻片上，加二丙酸酯荧光素溶液一滴，5-lO分钟后，在荧光显微镜下观察，时间不宜太长，以免细胞逐渐死亡，影响效果。 2.若着染是悬浮细胞，可将上述染色液数滴 直接加入细胞培养液5分钟后，可离心收集。 再用无细胞和无染料的培养液洗二次，即可收 集观察。上述染过的细胞可保存在4℃左右的 冰箱中，直到细胞死亡前故可观察。