转基因食品安全分析-课程-第三部分-转基因食品生物技术.ppt

第二章 转基因食品生物技术 何为生物技术？ 人类在1万年前就开始用牲畜耕种、饲养家畜，提供稳定的粮食和肉类。 6千年前利用发酵、酿造技术生产酒类、面包。 ——均属生物技术！ 远古人类发现，吃剩的米粥数日后变成 了醇香可口的饮料—人类最早发明的酒 丰富多彩的酒文化 一、传统生物技术 生物技术的发展与食品发展的历史是密不可分的，对促进人类社会的文明发展有着非常重要的意义，其发展简史如下： BC 6000年，古埃及人和古巴比仑人利用微生物发酵生产酒精； 我国也在石器时代后期，开始利用谷物酿酒； BC 4000年，古埃及人开始用酵母菌发酵生产面包； BC 221年，周代后期我国人民开始制作豆腐、酱油和醋 细菌的发现 我们已经知道,单个的细菌是十分微小的,它们的奥秘是怎样被发现的? 细菌的发现者是谁? 他为什么能发现细菌? 细菌的发现者是谁? 17世纪的荷兰人列文虎克并非职业科学家，但是他十分热衷自己制造显微镜 经过几年的努力，他制造了能放大300倍的显微镜，是世界先进水平 他为什么能发现细菌? 他是怎样让世人知道他的发现的? 列文·虎克把自己的发现仔细记录下来 他把观察结果寄给了当时的权威科学机构——英国皇家学会，从此名扬天下，被誉为细菌学的开创者 他的成功是偶然的吗？ 他善于发现和提出问题:微小的世界是怎样的? 制定实施实验计划:自制显微镜,坚持观察各种微小物体60年,做详细记录 善于表达和交流:把观察结果寄给英国皇家学会 他的做法就是一个标准的科学探究过程 他还发现了毛细血管、人类的精子、多种原生动物，成功绝非偶然遗憾：微生物从哪来？ 微生物学之父：法国人路易斯·巴斯德 巴斯德以严谨的科学精神向世人揭示了细菌的许多秘密。例如，细菌不会在自然界凭空出现 鹅颈瓶实验原理的应用 1、外科手术用具的消毒，挽救了许多病人的生命 鹅颈瓶实验原理的应用 2、巴氏消毒法，这种灭菌法由巴斯德发明,因此得名。 牛奶、啤酒和葡萄酒、罐头等，加热到 70～80℃维持5 ～30分钟，就能消灭绝大部分细菌，但不会影响味道和营养。 二、现代生物技术 豆科植物的根瘤能够固定空气中的氮 蜘蛛能够吐出蛛丝 资料三： 以往，治疗糖尿病的胰岛素是从动物胰腺中提取的，从100千克猪、牛等动物的胰腺只能提取3－4克胰岛素，治疗一个患者需宰杀40－50头牛，这种药物的造价昂贵。 基因工程：按照预定设计，在体外对不同来源DNA分子进行人工切割、连接，插入载体DNA分子，使遗传物质重新组合、改造，经转移、导入到受体细胞，使之持续稳定繁殖、目的基因扩增、表达，获得所需产品的工程。 分子水平操作阶段 ——获得含目的基因的重组体分子 第一环节 分离：提取、分离含目的基因的DNA分子和载体DNA分子，在分离提取过程中，注意质、量，减少损伤。第二环节 切割：选择合适的RE工具酶，分别对外源目的DNA分子和载体DNA分子进行酶解切割。 第三环节 连接：用DNA连接酶，将目的基因与载体在体外连接为一个重组DNA分子，并进行鉴定。 细胞水平操作阶段 ——把含目的基因的重组体导入受体细菌或受体细胞，赋予其“生命”让其表达，获得产品。第一环节 转移：利用DNA转移技术，把构建的重组 体导入到受体菌或受体细胞中，获得工程菌或工程细胞。第二环节 筛选：利用核酸杂交，酶切分析、PCR和表型特征等技术，筛选出已克隆化的工程菌/细胞。第三环节 表达：大量培养含重组体的工程菌/细胞，诱导其表达，并对表达产物进行鉴定，提取和纯化。 目的基因的分离获取是基因工程研究中最主要的要素，目的基因的成功分离是基因工程操作的关键。 由于每种基因，特别是单拷贝基因占整个生物基因组很小部分，且DNA的化学结构相似，都是由A、T、G、C四种碱基组成，具有极相似的理化性质，这给分离特定的目的基因带来很大困难。 基因分离的物理化学方法 鸟枪法分离基因 cDNA文库的建立与基因的分离 直接从特定的mRNA分离基因 基因组文库的建立和基因的分离 从蛋白质入手分离编码此蛋白的基因 基因的化学合成 利用PCR或PT-PCR扩增分离基因 基因分离的物理化学方法 根据DNA分子的两条链存在着G≡C、A＝T碱基配对。当DNA分子中某段的G≡C碱基对含量高，则其热稳定性就高，其熔解温度（Tm）值就高。因此可以通过控制熔解温度使富含A＝T区解链变性，而富含G≡C区仍维持双链，再利用单链核酸酶S1酶去除解开的单链部分，得到富G≡C区的DNA片段。例如海胆rDNA基因的分离。 这是基因工程在初始阶段所用的方法，目前已不用。 鸟枪法分离基因 用限制性内切酶将基因组D