2010-2011第一学期生物化学实验韩栓综述.docVIP

生物化学实验教案 生物化学实验原理、方法和技术是生命科学等诸多学科的重要研究手段，是生物科学专业学生必修的基础实验课程。它不仅是生物化学教学重要的组成部分，而且在培养学生分析和解决问题的能力、严谨的科学态度和独立工作的能力等方面，有着不可替代的作用。 按照生物科学专业教学计划的安排，并充分考虑实验室实验设备的现状以及学科发展的需要，本实验教学大纲主要以容易采摘及获得的动、植物材料为研究对象，围绕各类生物大分子的分离和测定，安排了一系列不同层次的实验项目，重点突出电泳、比色等常用的生化实验技术，所用的多为普通生化实验设备，一般无需大型精密仪器。所选实验均系多年来在教学和科研中较为成熟的实验方法，适合初学者使用。同时在实验选择上充分考虑到学科发展的成果，安排了一定比例的提高型实验。通过实验，使学生了解、验证、巩固和加深理论课的基本知识，掌握生物化学常用的实验技术和方法。 本课程单独设课,为考查课，在第三学期讲授，总学时数为43。 序号 实验项目 实验课时 实验类型 实验要求 每套仪器人数 1 糖类的性质实验 6 验证 必选 2 2 总糖的测定——蒽酮比色法 3 综合 必选 6 3 卵磷脂的提取 3 验证 必选 2 4 蛋白质及氨基酸的呈色反应 3 验证 必选 2 5 蛋白质的沉淀及变性 3 验证 必选 2 6 蛋白质的等电点测定 3 验证 必选 2 7 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 3 验证 必选 2 8 酪蛋白的制备 3 验证 必选 6 9 蛋白质含量测定法（一）Bradford法 3 综合 选修 6 10 蛋白质含量测定法（二）紫外吸收法 3 综合 选修 6 11 定磷法测定核酸含量 3 验证 选修 6 12 蛋白质的透析 3 验证 选修 2 13 甲醛滴定法测定氨基氮 3 验证 选修 6 14 紫外吸收法测定核酸的含量 3 验证 选修 6 预实验 基本操作 一.目的 1.熟悉实验室规则及常用生化仪器。 2.掌握各种仪器的正规操作。 3.清点洗刷实验用具。 实验内容 常用生化仪器 量器：量筒、离心管、吸量管、容量瓶 玻璃仪器 容器：烧杯、试管、锥形瓶、滴管 仪器：离心机、水浴箱、电泳仪、分光光度计等 玻璃仪器的洗涤 1、初用的玻璃仪器的清洗：表面附有碱性物质，先用去污粉洗，再用自来水冲洗干净，然后浸于盐酸溶液浸泡过夜，再用自来水反复冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，80℃烤干备用。 2、使用过的玻璃仪器洗涤 （1）一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，倒置晾干。 （2）量器，如滴定管、容量瓶等先用自来水冲洗，直至不挂水珠，再用蒸馏水冲洗1－2次，分干备用。若冲洗后仍挂水珠，则将其晾干后浸于铬酸洗液浸泡数小时。然后用自来水反复冲洗干净，再用蒸馏水冲洗1－2次，干燥备用。 （三）吸量管和微量移液器的使用 1.吸量管的使用（注意标签、选择容量大小合适的吸量管） （1）正确拿法 中指和拇指拿住吸管上端，食指顶住吸量管顶端 （2）取液 用橡皮球吸液体至刻度上，眼睛看着液面上升；吸完后用食指顶住吸量管上端。 （3）调刻度 吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。 （4）放液 吸量管移入准备接受溶液的容器中，仍使其出口尖端接触器壁，并成一角度，吸量管仍保持垂直。放开食指，使液体自动流出。奥氏吸量管和刻度到底的吸量管应吹出尖端残留的液体。移液管应最后靠壁15秒。 2.微量移液器的使用 调节体积选取钮至所需值，套上吸头，旋紧。垂直持握移液器，用大拇指按下液体吸放钮至第1档，将吸头插入待吸溶液，松开大拇指使吸放钮回复原位。将移液器移入准备接受液体的仪器，用大拇指再次按下液体吸放钮，至第1档后继续至第2档以排空液体。 3.练习吸量管的使用 取50ml锥形瓶加入未知酸5ml ,酚酞指示剂1滴，摇匀，用0.01mol/LNaOH滴定，记录结果。（无色酚酞遇酸不变色，遇碱变红。）滴定时边滴边摇动锥形瓶。 (四)离心机的使用方法 离心机是利用离心力将悬浮液中的微粒从溶液中分离出来的一种仪器。根据最高离心转速的不同可将离心机分为三种类型：普通离心机，其最高转速一般在4000转/分至6000转/分；高速离心机，转速可达10000转/分至25000转/分；超速离心机，转速可超过50000转/分以上。生化实验室常使用普通离心机。 普通离心机的使用方法： 1．使用前先检查变速旋钮是否在“0”位，外套管是否完整无损和垫有橡皮垫。 2．离心时先将待离心的物质转移到大小合适的离心管内，盛量