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遗传学实验参考 实验一 有丝分裂 洋葱根尖有丝分裂染色体标本制备及观察〖实验原理〗有丝分裂是细胞均等增殖的过程, 是体细胞分裂的主要方式.在有丝分裂过程中.细胞内每条染色体都能复制一份, 然后分配到子细胞中,因此两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目,形态和性质上均是相同的，在各种生长旺盛的植物组织中均存在着有丝分裂。分生组织→固定→解离→染色→压片→观察（间期、前期、中期、后期、末期） 材料洋葱或大蒜凤眼莲或种子根尖方法(1)取材:根当根长约2厘米时,从顶端剪取0.5—1厘米长的一段,预处理：药物处理（秋水仙素0.1%）或冷冻处理（冰箱） (2)固定:使用卡诺氏固定液(醇:冰醋酸=3:1)。一般在室温下,材料固定～24小时,如果材料比较大可以适当延长时间。固定完毕后将根尖取出,再用吸水纸将液体吸干。将根尖放入酒精中,在4℃冰箱中保存待用,保存时间不能超过两个月。 (3)解离:无论酸解还是酶解都可以很好的软化细胞壁,使细胞分散开。酸解比较经济,效果也很好。将根尖取出用1mol/L的盐酸解离,在60℃水浴恒温处理4分钟左右。,如果时间过长,则易使分生区和伸长区脱节,既不利于操作又会影响染色:过短则解离不足,压片时细胞不易分散,互相重叠,不易观察。(4)染色:在各种碱性染料中,卡宝品红(石炭酸品红)和苏木精等染色剂％龙胆紫溶液在此实验中的效果都比较好。用镊子将大蒜根尖取出来,在清水中漂洗后放在载玻片上,用镊子将根尖前端乌白色的根冠去掉,用镊子尖把根尖弄碎,用卡宝品红染色,这样可以使大多数细胞都充分的染色,～分钟后,盖上盖玻片,用拇指压盖玻片,使细胞分散开来,用吸水纸吸干多余的液体,即可观察。(5)观察:用低倍镜在生长点附近可观察到已被染成淡紫色的、单层、排列紧密的呈正方形的细胞。换上高倍镜进行观察，即可找到处于细胞分裂间期和有丝分裂前期、中期、后期、末期的细胞，可清晰地辨认出有丝分裂各时期染色体行为的变化植物多倍体诱发实验 多倍体普遍存在于植物界，目前已知道被子植物中有1/3或更多的物种是多倍体，除了自然界存在的多倍体物种之外，又可采用分为物理的（温度剧变、机械损伤、各种射线处理等）和化学方法的（各种植物碱、麻醉剂、植物生长激素等）诱导方法。在诱发多倍体方法中，以应用化学药剂更为有效。如秋水仙素、萘嵌戊烷、异生长素、富民农等，都可诱发多倍体，其中以秋水仙素效果最好，使用最为广泛。其中，秋水仙素是诱导多倍体的最有效的方法之一。秋水仙素具有麻醉作用，对植物种子、幼芽、花蕾、花粉、嫩枝等可产生诱变作用。它的主要作用是抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使染色体不走向两极而被阻止在分裂中期，这样细胞不能继续分裂，从而产生染色体数目加倍的核。若染色体加倍的细胞继续分裂，就形成多倍性的组织，由多倍性组织分化产生的性细胞，所产生的配子是多倍性的，因而也可通过有性繁殖方法把多倍体繁殖下去。 多倍体已成功地应用于植物育种，用人工方法诱导的多倍体，可以得到一般二倍体所没有的优良经济性状，如粒大、穗长、抗病性强等。三倍体西瓜、三倍体甜菜、八倍体小黑麦已在生产上应用。 二、实验目的 1．了解人工诱导多倍体的原理，初步掌握用秋水仙素诱发多倍体的方2．了解植物多倍体细胞染色体加倍的特点实验器具和药品种子。0.2％秋水仙素溶液，1mol／L HCl溶液 、改良苯酚品红溶液。 实验步骤1．待新长出的不定根长约1.5－2mm左右时，移到盛有秋水仙素溶液的培养皿中，直到根尖膨大为止冰箱冷冻处理。再恢复生长24小时，诱导后细胞为多倍体细胞。2．取下已膨大的根尖或幼芽，水洗后进行常规制片（固定，保存，水洗，酸解，水洗，染色，压片等过程），染色时滴上一、二滴改良苯酚品红染液，10－15分钟以后压片。3．观察多倍体细胞染色体的形态并统计其染色体数目。 观察与鉴定　　处理后的植株和未处理植株在外部形态上和结构上，是有区别的。常采用的方法是观察和比较两者气孔的大小。将叶面表皮撕下在显微镜下观察，多倍体叶面气孔比二倍体大很多，从外部形态上加倍后生长的植株比二倍体高大，叶片肥厚。在形态观察的基础上，可进一步进行镜检观察染色体数目的变化。 六 注意事项 1. 秋水仙素处理时间应根据供试材料的细胞周期而定，当处理时间介于供试材料细胞周期的一倍到两倍之间时，可观察到细胞由二倍体变为四倍体，当处理时间多于供 试材料细胞周期的两倍以上时，供试材料的细胞可从四倍体变为八倍体，因此，在培养多倍体细胞时，应注意用秋水仙素的处理时间；此外，秋水仙素的浓度对处理 效果也有影响，应注意掌握。2. 多倍体细胞中染色体的形态有两种，一种为一条染色体含有一条单体，另一种为一条染色体含有两条单体，应注意观察，并思考其形成原因。 3. 秋水仙素为剧毒药品，实验中应注意不要将药品沾到皮肤上，眼睛中。如果沾到皮