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生物技术虚拟实验报告 课题名称：人canstatin基因的克隆与表达 学院：生命科学学院 班级： 姓名： 学号： 指导老师：张大鹏 报告完成时间：2014年6月18日 摘要： 本文通过对以前在实验室做实验的方法总结、网上查找资料、以及与同学探讨学习，从而得出对于人canstatin基因克隆与表达的具体实验思路及学会使用各种所需软件。然后利用多种软件在电脑上进每一步骤的虚拟运行，获得目的基因与载体、设计引物、构建表达载体、表达载体的虚拟电泳检测。并设计蛋白质纯化的策略。运用相关软件进行参考文献的生成。 1.研究目的: Canstatin是由Kamphaus等发现的一种新的血管生成抑制素，研究表明，它能有效抑制内皮细胞管结构的形成，有效抑制内皮细胞的增殖、转移并诱导凋亡，从而抑制肿瘤生长的作用。为了进一步了解canstatin对血管生成和肿瘤生长的抑制作用，本文通过虚拟实验技术，克隆Canstatin基因序列，构建原核表达载体，并进行canstatin蛋白表达、活性鉴定。为进一步研究及临床应用奠定基础。 ADDIN EN.CITE EndNoteCiteAuthor蒋日成/AuthorYear2002/YearRecNum29/RecNumDisplayTextstyle face=superscript[1]/style/DisplayTextrecordrec-number29/rec-numberforeign-keyskey app=EN db-id=0svpezf2kt5ve6ervf0xsz22wadv00frsa9s timestamp=140315464429/key/foreign-keysref-type name=Journal Article17/ref-typecontributorsauthorsauthor蒋日成/authorauthor唐运莲/authorauthor方唯意/authorauthor闾宏伟/authorauthor冬毕华/author/authors/contributorsauth-address南华大学肿瘤所,衡阳,421001/auth-addresstitlestitle人canstatin基因的克隆/titlesecondary-title生物技术通讯/secondary-title/titlesperiodicalfull-title生物技术通讯/full-title/periodicalpages261-263/pagesvolume13/volumenumber4/numberkeywordskeywordcanstatin 逆转录聚合酶链反应 克隆/keyword/keywordsdatesyear2002/year/datesisbn1009-0002/isbnurlsrelated-urlsurl/Periodical_swjstx200204004.aspx/url/related-urls/urlselectronic-resource-num10.3969/j.issn.1009-0002.2002.04.004/electronic-resource-numremote-database-provider北京万方数据股份有限公司/remote-database-providerlanguagechi/language/record/Cite/EndNote[1](蒋日成等 2002) 2.研究流程图： 利用NCBI搜索出人 利用NCBI搜索出人canstatin基因的序列，并进行文件输出 利用Add-gene Vector Database 进行pET-22b(+)载体的genbank文件输出 NTI软件数据库建立，数据导入，载体和目的基因的酶切位点分析及引物设计 将目的基因调整方向插入到基因中得到完整的表达载体，并进行虚拟电泳检测 蛋白产物纯化策略 图1 研究流程图 3．具体研究方法，步骤并截图说明： 1.首先在NCBI（/sites/gquery）中查找人的canstatin基因,从而获得基因序列,如图2: 图2 保存序列： 图3 点击，得到其mRNA序列： Homo sapiens canstatin mRNA, partial cds ORIGIN 1 gtcagcatcg gctacctcct ggtgaagcac agccagacgg accaggagcc catgtgcccg 61 gtgggcatga acaaactctg gagtggatac agcctgctgt acttcgaggg ccaggagaag 121 gcgcacaacc aggacctggg gctggcgggc