动物的克隆详解.ppt

第三节 动物的克隆 动物克隆的技术基础： 一、动物克隆的技术基础： 动物的细胞和组织培养 1、动物细胞全能性特点？ 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？ 不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中，可以伴随一定的组织分化；但是不管采用什么手段和培养条件，由于细胞的运动、变化，培养物的组织成分也发生结构功能变异，结果长期的培养过程只能使单一类型的细胞保存下来，最终成了简单的细胞培养。 3、动物的细胞和组织培养的理论依据（原理）？ 细胞增殖 动物克隆的技术基础： 主要有：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等 根据细胞的生理生化代谢特点,人工配制而成,为细胞提供一个近似体内生存环境,又便于控制和标准化操作 基本成分 各种碳水化合物(糖)、氨基酸、维生素、无机盐、生长因子、激素等 常用培养液 几十种 定义 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养. 植物细胞和动物细胞培养的比较 动物克隆的技术基础： 动物克隆的技术基础： 3、克隆培养法（细胞克隆） 最基本要求：来源于单个细胞 无限细胞系、转化或肿瘤细胞的克隆易于原代细胞、有限细胞系 提高细胞克隆形成率的措施:添加血清等（P30） 主要用途：从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系 动物组织培养技术的发展 19世纪，动物组织培养萌芽。 1885年，鸡神经板在生理盐水中培养成功，“组织培养”一词产生。 1903年，在腹水及血清中培养皮肤及白细胞，存活1个月，有细胞分裂。 1907年，蛙胚神经管培养在蛙淋巴液中，看到了阿米巴运动，也创立了悬浮培养法。真正的组织培养开始。 1912年 1943年，在致癌物的诱导下培养小鼠结缔组织，得到可连续传代的L-细胞系；此后，细胞克隆成功。 1951年，建成海拉细胞系。 1.蛙胚胎干细胞核移植：1952年 罗伯特.布里格斯 豹纹蛙→囊胚期细胞核→去核的同种蛙卵→发育成个体 多莉羊的培育过程 3．利用下列细胞工程技术培育出的新个体中，只具有一个亲本遗传性状的是（ ） ①细胞和组织培养 ②细胞融合 ③动物胚胎移植 ④克隆技术 A.①② B.②③ C.①④ D.②④ 5．在动物细胞培养助有关叙述中正确的是 （ 　） A.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞分泌蛋白　　 B.动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散　　 C.细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中　 D.培养至50代后能继续传代的传代细胞叫细胞株 动物克隆的技术基础： 定义 指用自然或人工方法,使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。 不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。 诱导融合的因素 生物法：灭活的仙台病毒诱导融合 利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。 化学法：聚乙二醇诱导融合 因为聚乙二醇易得、简便，且融合效果稳定，是目前应用最广泛的方法。 物理法：电激、激光诱导融合 动物克隆的技术基础： 5、动物细胞融合技术的应用 由于细胞杂交中染色体容易丢失，因此利用杂交细胞检测特定染色体丢失与特定基因产物减少的对应关系，可以进行基因定位。 利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。 人们获得抗体的传统方法是? 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体 这种方法的缺点是什么? 效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？ 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？ B淋巴细胞在体外不能无限增殖。 单克隆抗体的制备——极富创造性的方案 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。 动物免疫 分离B淋巴细胞 细胞融合——淋巴细胞杂交瘤的制备 杂交瘤细胞的筛选 动物免疫 分离B淋巴细胞 细胞融合——淋巴细胞杂交瘤的制备 杂交瘤细胞的筛选 单克隆抗体的制备和冻存 单克隆抗体的纯化 1、单克隆抗体作为诊断试剂,在临床生化诊断、病理组织定位、体内