分子生物学技术在食源性微生物检测中的应用 胡竞进.docx

分子生物学技术在食源性微生物检测中的应用 (浙江大学生物系统工程与食品科学学院 胡竞进 摘要：食源性微生物污染是食品安全中最突出的问题之一,对人们的健康有着深远的影响。然而，传统的食源性微生物检测方法繁琐复杂、周期较长, 因此以分子生物学技术为代表的快速、简便、特异的检测方法成为研究的热点。本文介绍了以聚合酶链式反应、基因探针检测法、变形梯度凝胶电泳、基因芯片、随机引物扩增多态性等分子生物学技术在食源性微生物检测中的应用，为今后进一步研究和开发新检测技术提供一些参考。 关键词：食源性微生物；分子生物学技术；聚合酶链式反应；基因探针；变性梯度凝胶电泳；基因芯片；随机引物扩增多态性 Application of molecular biotechnology in foodborne microorganisms detection College of Biosystems engineering and Food Science JingJin Hu Abstract: The pollution caused by foodborne microorganisms is one of the most dominant issue for food safety, which has deeply affected the public health.However, traditional methods for detection of food borne pathogens are quite complex, and cost much time, so increasing number researches focus on the quick, convenient and differential methods such as molecular biotechnology. This article introduced several molecular biotechnology which commonly used in detection of food microorganisms including polymerase chain reaction (PCR), gene probe , denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE), gene chip , random amplified polymorphism DNA (RAPD), aiming to provide a reference for the further study. Key words: foodborne microorganisms; molecular biotechnology; PCR; gene probe ; DGGE; gene chip ; RAPD 微生物污染是诸多食品安全问题中最突出的环节之一，一方面因为微生物个体小、生长快、分布广、种类多，易于在食品生产、运输、销售过程中造成污染；另一方面，微生物在污染食品后其菌体本身以及产生的毒素等代谢产物会对食品本身造成品质的破坏使其失去使用价值造成经济损失，并会对误食者造成健康上的损害甚至生命的威胁。据世界卫生组织(WHO)统计,全世界每年发生食源性疾病数十亿人,甚至在发达国家,也有三分之一的人群每年遭受食源性致病菌的侵袭。因此，食品微生物检测对于保障食品安全起着及其重要的作用。 传统的食源性微生物检测和鉴定方法主要有分离培养鉴定法、生化鉴定、酶联免疫吸附法(ELISA)及自动酶联荧光免疫检测方法、电阻抗测量法、放射测量法、生物发光法、直接外荧光过滤技术、色法等物理和化学的方法。 传统的微生物检测方法虽然有效，但存在速度慢、成本高、效率低等问题,例如，需要5一7天的培养鉴定时间,不能实现快速检测；微生物的生化特征以及生化试剂的不稳定,经常鉴定的结果不准确、重复性差。因此，传统的检测方法越来越难以满足现代社会快速检测的要求。随着细菌基因组学和分子生物学技术的飞速发展，诞生了许多准确度和灵敏度高、特异性强、操作简便、检测周期短、效率高的分子生物学技术，它们越来越广泛地应用于食源性微生物的检测。本文对在食品病原微生物检测中常用的几种分子生物学技术原理及应用。 1聚合酶链式反应（ polymerase chain reaction，PCR） 美国人 Mullis于1985年发明了PCR技术，并荣获了1993年诺贝尔化学奖。PCR现在已成为生命科学领域最常用的分子生物学技术之一，它是一种体外酶促合成DNA 片段方法，由变性、退火和延伸等几步反应组成一个循环