高二生物选修四基因工程解说.ppt

2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： * 1.2 基因工程的基本操作程序 * * 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 编码区： 能转录，编码蛋白质 非编码区： 不编码蛋白质,能调控遗传信息表达 * * 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 内含子 外显子 与RNA聚合酶结合位点 编码区： 非编码区： 外显子： 内含子： 能编码蛋白质的序列 不能编码蛋白质的序列 * * 非编码区 非编码区 编码区 RNA聚合酶结合位点 外显子 内含子 终止子 启动子 原核 真核 基因的结构 * * 原核细胞 真核细胞 不同点 编码区是 _____的 编码区是间隔的、_____的 相同点 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 * * 山西省孝义市第二中学 基因工程的基本操作程序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 操作过程 目的基因的检测与鉴定 * * 目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的基因 目的基因的获取 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 即：将需要的基因从供体生物细胞内提取出来 　目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰岛素基因等。也可以是一些具有调控作用的因子 * * 获得目的基因的方法 从基因文库中获取目的基因 1.什么是基因文库？ 2.怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因？ 种类： 基因组文库： 部分基因文库：(如cDNA文库) 基因的核苷酸序列等 含有一种生物的全部基因 含有一种生物的部分基因 根据基因的有关信息：如基因的转录产物mRNA 2.基因文库的构建方法 ①鸟枪法： 供体细胞中的DNA 许多DNA片段 运载体 限制酶 与载体连接 载入 受体细胞 产生特定性状 导入 外源DNA扩增 目的基因 分离 (直接分离法) (一)从基因文库中获取目的基因 （一）基因文库的构建 （每个受体菌含有一段不同的DNA片段） （2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成 与载体连接 导入受体菌群 mRNA 逆转录酶 杂交双链 核酸酶H 单链DNA DNA聚合酶 双链DNA (cDNA) 该生物 cDNA文库 1、 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 通过这项技术可在短时间内大量扩增目的基因 因为整个过程是在体外进行，所以又叫做体外DNA扩增技术。 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 2、原理： DNA复制 （二）利用PCR技术扩增目的基因 四种脱氧核苷酸(dNTP) 一对引物： 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） 模板DNA( 需含有目的基因 ) 4、条件： 一对寡核苷酸序列：与目的基因的起始段互补 一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物 3、前提： 温度控制 PCR技术扩增过程 a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下， 断裂，形成_______ b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物 与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在TaqDNA聚合酶的作用下，从引物的______________________延伸，合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 5′端→3′端 （三）通过DNA合成仪用化学方法人工合成 DNA合成仪 蛋白质的氨基酸顺序 mRAN 核苷酸序列 基因DNA的核苷酸序列 目的 基因 推测 推测 合成 当基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷酸序列已知时，可采用此种方法。 DNA合成仪 1.用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 2.用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。 —— 核心 3.将切下的目的基因片段插入质粒的______处， 再加入适量___________，形成了一个重组 DNA分子（重组质粒） 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 的黏性末端 切口 DNA连接酶 相同 (二)基因表达载体的构建 * * 质粒 DNA分