高产碱性磷酸酶的枯草杆菌培养基优化方案解说.ppt

PPT演讲： PPT制作： 资料查找： 高产碱性磷酸酶的枯草杆菌培养基优化方案 枯草芽孢杆菌简介 枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭，需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。 碱性磷酸酶 碱性磷酸酶能催化几乎所有的磷酸单脂的水解反应，产生无机磷酸。该酶广泛存在直接参与磷酸基团的转移和钙磷代谢，维持体内适宜的钙磷比例，在脊椎动物的骨化作用中起着重要作用。而且还与角蛋白等蛋白质的分泌有关。本PPT是以研究枯草杆菌在不同条件培养纸杯碱性磷酸酶，确定枯草杆菌碱性磷酸酶制备的最佳方案。 主要试剂和仪器 1.菌种：高产碱性磷酸酶的枯草杆菌的菌种 2.固体培养基（用于平板菌落计数）：无水葡萄糖30.0g、蛋白胨10.0g、酵母膏5.0g、磷酸二氢钾4.5g、碳酸钙2.0g和琼脂2.0g，无菌水1000ml 3.液体培养基：葡萄糖30.0g、蛋白胨10.0g、酵母膏5.0g、磷酸二氢钾4.5g、碳酸钙2.0g和无菌水1000ml 4.紫外线分光光度计Cary 100,振荡培养箱BS-IEA，显微镜Olympus CX41，蒸汽消毒器YXQG02，自控振荡机ZD，电子天平AG204;吸管、培养皿、玻璃涂棒、试管及试管架、三角烧瓶等常用实验器皿。 液体培养基优化正交试验设计 枯草杆菌生长受到多种因素的影响，根据数理统计原理，利用规格化的表格---- 正交表，合理安排试验，即分别安排16个试验组，每试验组3个重复，共48个测试样。接种后测试 ，然后每隔8h测试1次 ，连续5次。根据检测结果进行统计分析，筛选出枯草杆菌最佳培养的方案。其正交方案见表1. 试验结果 目的 正交试验的条件下，优化出菌株生长配方。由于各试验组配方的酵母膏和蛋白胨含量不同。培养基颜色也不同，导致接种后检测的初始 值存在着较大差异。通过对初始 值进行方差分析，F=7.17 =2.65，即P〈0.01，因此，差异极显著。为了减少这种差异，本试验所有试验组初始 为零，将菌株生长所测得的 值为相对值。试验结果见表3。 试验结果表明，当培养基的配方为无水葡萄糖3.50g/L、蛋白胨0.83g/L、酵母膏0.5g/L、磷酸二氢钾0.35g/L、碳酸钙0.25g/L.根据数理统计分析，优化的枯草杆菌培养条件能有效促进枯草杆菌生长，提升枯草杆菌产量。 谢谢