国际协调会非灭菌产品微生物检查ICH(11版)分解.doc

非灭菌产品微生物检查：微生物计数法（） 概述 本检查法嗜温细菌和真菌。 本检查法用于确定非规定灭菌制剂及其原、辅料是否符合相应的微生物标准，其量和结果判断等本检查法不适用于活菌。 本检查法自动测定方法 一般程序 本检查应在严格避免外来微生物污染供试品的实验条件下进行，如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或。如果使用了灭活剂有效性进行验证。 如果在供试液制备时使用了表面活性剂，应微生物。 计数方法 薄膜过滤法或平板计数法最大数法（Most-Probabl -Number, MPN）精度较低，特性和其微生物限度标准计数方法方法的适用性必须确定。 促生长验和计数方法适用性微生物方法。检验程序发生变化可能检验结果，。 制备 程序制备。试验菌应采用适宜的保存技术试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的菌种为第0代）。菌株的培养见表1。 使用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或者pH7.2磷酸盐缓冲液制备菌悬液，黑曲霉孢子悬液可0.05％（v/v）聚山梨酯80缓冲液。菌悬液应在2小时内使用，保存在2～8℃的菌悬液可以在24小时内使用。黑曲霉和枯草芽孢杆菌稳定孢子孢子稳定孢子可保存在2～8℃使用。 表1 实验用菌液的制备和使用 培养基促生长实验 计数方法适用性实验 实验菌株 菌液制备 需氧菌霉菌及酵母菌 需氧菌霉菌及酵母菌 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕 胰酪胨大豆琼脂或胰酪胨大豆肉汤，30～35℃培养18～24小时 胰酪胨大豆琼脂和胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 胰酪胨大豆琼脂/MPN胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10104〕 胰酪胨大豆琼脂或胰酪胨大豆肉汤，30～35℃培养18～24小时 胰酪胨大豆琼脂和胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 胰酪胨大豆琼脂/MPN胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)〔CMCC（B）63501〕 胰酪胨大豆琼脂或胰酪胨大豆肉汤，30～35℃培养18～24小时 胰酪胨大豆琼脂和胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 胰酪胨大豆琼脂/MPN胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98001〕 沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤，20～25℃培养2～3天 胰酪胨大豆琼脂 ≤100cfu 30～35℃，≤5天 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu 20～25℃，≤5天 胰酪胨大豆琼脂 ≤100cfu 30～35℃，≤5天 MPN法 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu 20～25℃，≤5天 黑曲霉(Aspergillus niger)〔CMCC(F)98 003〕 沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯葡萄糖琼脂，20～25℃培养5～7天，或直到孢子胰酪胨大豆琼脂 ≤100cfu 30～35℃，≤5天 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu 20～25℃，≤5天 胰酪胨大豆琼脂 ≤100cfu 30～35℃，≤5天 MPN法 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu 20～25℃，≤5天 阴性对照为实验条件是否符合要求，应设阴性对照组以稀释剂代替供试品阴性对照应无菌生长。 培养基促生长实验 每批培养基、培养基或按配制的培养基促生长。 接种如表1所示的少量微生物（≤100cfu）至胰酪胨大豆肉汤管或胰酪胨大豆琼脂平板，每一批培养基分别制备一管/皿；接种如表1所示的少量微生物（≤100cfu）至沙氏葡萄糖琼脂平板，每一批培养基分别制备一皿，按表1所列条件培养。 对于固体培养基，从被测试培养基获得的菌落数不得大于或小于来自验证过的标准培养基菌落数的2倍，并且其新鲜培养物的菌落形态应与之前验证过的标准培养基上的菌落形态一致；对于液体培养基，被测试培养基管出现清晰可见微生物的时间和形态应与之前验证过的标准培养基管一致。 计数方法实用性实验 供试液制备 供试液供试品的理特性制备方法 ，下列制备方法均不适，应适宜的替代方法。 水溶性产品：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、pH7.2磷酸盐缓冲液或胰酪胨大豆肉汤培养基溶解或稀释如果需要，调节供试液pH至6～8同一稀释液供试液进一步稀释。 水不溶性非油酯类产品：用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、pH7.2磷酸盐缓冲液或胰酪胨大豆肉汤培养基10倍混悬能力较差的，可在稀释剂中加入表面活性剂0.1%(g/v)的聚山梨酯80。如果需要，调节供试液pH至6～8同一稀释液供试液进一步稀释。 油酯类产品：无菌十四烷酸异丙酯，或量的无菌聚山梨酯