骨唾液酸蛋白糖基化修饰对成骨的影响.pdf

中文摘要 骨唾液酸蛋白糖基化修饰对成骨的影响 链，并通过流式细胞仪验证；同时利用ALP、von 等成骨细胞生物学检测手段观察BSPN．糖基化修饰对成骨的影响。 Subclone 5．在MC3T3一E1 14成骨细胞培养模型中，加入肽N．糖苷酶F、O．糖 平的变化，同时利用凝集素标记、流式细胞仪鉴定、质谱分析等方法，探讨BSP 的糖链结构。 结果 Subclone 1．成功建立了MC3T3．E1 14成骨细胞培养模型，证明MC3T3．E1 Subclone 14细胞培养至10d左右ALP染色呈强阳性反应，即成骨细胞大量形成， vonKossa染色至14d左右呈强阳性反应，说明成骨细胞分泌的骨基质进入矿化期。 2．在成骨细胞培养模型中加入rhBSP及0．糖苷酶消化的去0．糖基化rhBSP， ALP、yon Kossa染色结果显示：BSPO一糖基化修饰影响了成骨细胞和骨矿化的形 Subclone 成；同时成功构建和筛选出在MC3T3．E1 14成骨细胞培养模型中高表达 的高效siRNA表达载体ppGalNAcTl．1545矛I 养模型后有效抑制了成骨细胞分化和骨矿化的形成，证实BSPO一糖基化修饰影响 成骨主要为ppGalNAcTl、T4两个糖基转移酶。 3．BSP相关的末端唾液酸化对骨矿化的影响主要以0【2，3唾液酸为主，它可能通 过影响维生素D受体VDR的表达，从而影响骨的矿化，但对成骨细胞的分化无明 显影响。 及不同浓度的衣霉素，ALP、vonKossa染色等结果显示：BSP N．糖基化修饰及N． 糖基化糖链合成抑制剂衣霉素对成骨无明显影响。 5．肽N．糖苷酶F释放糖蛋白中N一连接的糖链；质谱检查发现，经唾液酸酶处 进一步证实BSP是一个含N．糖链、O．糖链及末端唾液酸的糖基化蛋白。 综上所述，我们成功建立了MC3T3．E1Subclone 14成骨细胞培养模型；证实 BSP 骨唾液酸蛋白糖基化修饰对成骨的影响 中文摘要 关的术端唾液酸化主要影响骨矿化的形成，并以0【2，3唾液酸为主，但对成骨细胞 的分化无明显影响；BSPN．糖基化修饰及相关的N糖链对成骨无明显影响；同时 我们利用现有的质谱技术初步分析了BSP的糖链结构，进一步证实BSP是一个含 N．糖链、O．糖链及末端唾液酸结构的糖基化蛋白，且BSP糖基化修饰影响成骨主 要以BSPO．糖基化修饰为主。 关键词：骨唾液酸蛋白；成骨细胞；糖基化修饰；凝集素；质谱 学生：徐岚 导师：吴士良 王金熙 英文摘要 骨唾液酸蛋白糖基化修饰对成骨的影响 TheEffectof ofBone on GlycosylationSialoprotein Osteogenesis ABSTRACT theeffectof ofbone Objective：Toinvestigate glycosylation and its mechanisms osteogenesispossible Methods： 1．Establishmentoface