Zeylenone通过抑制PI3KAKTmTOR和ERKMAPK信号通路诱导宫颈癌细胞凋亡的分子机制研究.pdf

中国医学科学院北京协和医学院 目录 英文缩略词表……………………………………………………………………………．1 摘要……………………………………………………………………………………………………………………．4 Abstract…．………．…．．…．…．…．……．………．．……．…．…．…．……．……．…．…………．…．．…．………．……．…8 5 前言…………………………………………………………………………………………………………………一1日U舌…………………………………………………………………………………………………………………．．1 材料与方法………………………………………………………………………………18 1实验材料………………………………………………………………………………18 1．1药品…………………………………………………………………………………………………………………18 1．2实验试剂…………………………………………·．．．．J O……………………………·18 1．3实验仪器…………………………………………………………………………………”20 1．4主要溶液的配制…………………………………………………………………………一20 1．5细胞株……………………………………………………………………………………·21 2、实验方法……………………………………………………………………………．2l 2．1受试化合物的配制方法………………………………………………………………”21 2．2MTT法检测Zey体外对肿瘤细胞存活率的影响………………………………………”21 2．3细胞培养及形态观察…………………………………………………………………”22 2．4 2．8 2．10 2．11 2．12Annexin 1 2．13 DCFH．DA荧光探针检测化合物对HeLa细胞活性氧产生的影响……………………32 2．14 2．15 2．16 PharmaDB药效团模型筛选zey作用靶点……………………………………………34 2．17Western 2．19Real—Time PCR…………………·……………………………………………………………………………··38 2．20 Zey对人宫颈癌细胞HeLa裸鼠异体移植瘤的抑制作用……………………………一40 3数据处理与统计学分析………………………………………………………………43 实验结果…………………………………………………………………………………44 万方数据 中国医学科学院北京协和医学院 1 Zey体外抗肿瘤作用初步研究………………………………………………………．44 1．1 J．．．．．．IWl D……………………··44 Zey的瘤谱筛查…………………………………………”I 1．2 1．3 1．4 1．5 1．6 1．7Zey对HeLa细胞基质金属蛋白酶分泌的影响…………………………………………52 2SILAC分析Zey对肿瘤细胞蛋白质组表达变化的影响……………………………53 2．1标记效率的检测………………………………………………………………………“53 2．2 2．3蛋白分类…………………………………………………………………………………“54 2．4Zey通过14—3—3家族和Bcl．2通路诱导凋亡……………………………………………·57 2．5Zey通过HSP70家族诱导凋亡…………………………………………………………57 2．6Zey