分光光度计的使用汇总.ppt

分光光度计的使用 张国川 （1）分光光度计的主要部件 光源：发出所需波长范围内的连续光谱，有足够 的光强度,稳定。 可见光区：钨灯，碘钨灯(320～2500nm) 紫外区：氢灯，氘灯(180～375nm) 单色器：将光源发出的连续光谱分解为单色光的 装置。 棱镜:玻璃350～3200nm, 石英185～4000nm 光栅:波长范围宽, 色散均匀,分辨性能好, 使用方便 吸收池：(比色皿)用于盛待测及参比溶液。 可见光区：光学玻璃池 紫外区：石英池 检测器：利用光电效应，将光能转换成 电流信号。 光电池，光电管，光电倍增管 指示器： 低档仪器：刻度显示 中高档仪器：数字显示，自动扫描记录 酸度计使用 天平使用 滴定管使用 移液管使用 容量瓶使用 离心机使用 烘箱使用 * 光源 单色器 吸收池 检测系统 稳压电源 通过棱镜或光栅得到一束近似的单色光. 波长可调, 故选择性好, 准确度高. 分光光度法的主要部件框架 （2）分光光度计的类型 722型分光光度计结构方框图 光源 吸收池 检测系统 分光系统 分光光度计的使用 （1）选择波长 拧动此旋钮 至所需波长 （2）将测试溶液装入吸收池（操作如下） 手拿毛玻璃面， 先用待装液漂洗 3 遍， 装入量为吸收池高度的 3 / 4， 透光面 毛面 容量的3/4 用镜头纸擦净透光面， 不要将纸团成球， 不要来回擦， 而要向同一方向擦。 所有关于吸收池的操作 均在实验台面之上的空 间进行，这样可保证一 旦吸收池滑落时掉在台 面上，不至于摔破。 通过手柄将池架推到头， 此时黑体对着入射光。 遮光黑体 2 号 1 号 0 号 放入吸收池架（透光面向着透光窗一侧）。 放置顺序为： 透 光 窗 然后盖上盖子。 按 MODE 键 （3）调节投射比为 0.000 至投射比（T）灯亮 T 方式 “0%”键 按一下“0%”键，此时仪器自动校正后显示 “0.000”。 （有的分光光度计没有黑体，需要在打开试样 室盖（起黑体的作用）的情况下调 T = 0.000） （4）调透射比为 100% 将手柄向操作者方向拉出一档（听到“咔嚓”一 声），此时参比（0 号）溶液进入光路。 按一下“100% T”键， 此时仪器显示“BLA” 表示仪器正在自动校 正，校正完毕后显示 “100.0”。 100% T B L A 100.0 （5）重复（验证）（3）、（4）两步，直至透 射比为 0.000 和 100% 不变。 按“MODE”键至“ABSORBANCE”灯亮（此 时转换到测吸光度功能上）。 将手柄向操作者方向再拉出一档（听到“咔嚓” 一声），此时被测（1 号）溶液进入光路。 此时仪器所显示的数值即为 1 号被测溶液的吸光 度值（记录下来）。 - 0.000 0.186 再拉出一档，仪器所显示的数值为 2 号溶液的吸 光度值。 将 1、2 号吸收池换装入 3 、4 号溶液（黑体 和 0 号参比溶液不动），然后同法测定各溶液的 吸光度、并一一记录下来，记录格式如下表。 ×.××× ×.××× ×.××× ×.××× ×.××× ×.××× ×.××× 吸光度（A） 未知 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.000 6 5 4 3 2 1 0 编 号 吸 光 度 (A) ● ● ● ● ● 绘制标准曲线： 根据未知溶液（6 号 溶液）的吸光度从标准 曲线上查得试液浓度。 原试液含铁质量浓度 = 查得的浓度 × 稀释倍数 实验报告格式 一、实验目的 ……………………………………………………… 二、实验原理 ……………………………………………………… 三、实验步骤 滴加氨水至黄色后再多加 4 mL 。定容、摇匀，测吸光度。 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 V磺基水杨酸/mL 4 4 4 4 4 4 4 5.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 V试液/mL 0.00 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 V标准液/mL 6 5 4 3 2 1 0 编 号 四、数据记录 ×.××× ×.××× ×.××× ×.××× ×.××× ×.××× ×.××× 吸光度（A） 未知 5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.000 6 5 4 3 2 1 0 编 号 五、标准曲线（图） 六、从标准曲线上查得的 七、原试液的 八、思考题 *