20120823-海洋生物制品学-第三章解释.doc

第三章 生物制品的制备 第一节 一般生物制品的制备方法 一、原料的选择、预处理和保存方法 1.原料的选择 生物原料科来源于人体、动物、植物、微生物及海洋生物的天然的生物组织和分泌物，也可来源于人工细菌、工程细胞及人工免疫的动植物。 （1）对于原料的选择应遵循的原则 ①其有效成分应含量高，新鲜；②原料来源于丰富，产地接近；③其中杂志含量较少，对由起始原料引入的杂志、异构体，必要时应进行相关的研究并提供质量控制方法；④原料的成本要低；⑤起始原料应质量稳定、可以控制，富含所需目的物并易于获得，原材料还应有来源、标准和供货商的检验报告，必要时应根据制备工艺的要求建立内控标准；⑥对具有手性的起始原料，应制订作为杂志的对映异构体或非对映异构体的限度，同时应对起始原料在制备过程中可能引入的杂质有一定的了解。 （2）原料选择的注意事项 生物在不同的生长、发育期可合成不同的生化成分，所以生物的长期对生理活性物质的含量影响很大。对于不同来源的原料，要注意选取最佳的生长时期。①植物原料要注意它生长的季节性；②微生物原料最好选取对数生长期，因为这时的微生物生长代谢能力最强；③动物原料要选取适当的年龄和性别。 2.原料的预处理 生理活性物质易失活与降解，采集时必须保持材料的新鲜，防治腐败、变质与微生物污染。因此生物材料的采摘必须快速，及时进行预处理，并进行保存。 ①动物原料 采集后要立即处理，去除结缔组织、脂肪组织等，并迅速冷冻贮存。 ②植物细胞 要择时采集并就地去除不用的部分，保鲜处理。 ③微生物原料 要及时将菌细胞与培养液分开，进行保鲜处理。 3.原料的保存方法 通常使用的有以下几种方法。 （1）冷冻法 该方法适用于所有生物原料。常用-40℃速冻。如在-80～-70℃保存时间更长。 （2）有机溶剂脱水法 常用的有机溶剂是丙酮。该法适用于原料少而价值高、有机溶剂对活性物质没有破坏作用的原料，如脑垂体等。 （3）防腐剂保鲜 常用乙醇、苯酚、甘油等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。对于不同生物还有不同的保存方法，例如，对于动物细胞，可以有组织块保存法、组织悬液保存法、单层细胞保存法等。对于微生物菌的保存有斜面保存法、矿油法、索氏法、干硅胶法、真空冷冻干燥法、砂土管法。 二、提取 目的是除去与产物性质差异较大的杂质，为后道精致工序创造有利条件。提取操作中，通常是目的产物要求有较大浓缩比的过程。可选技术也比较多。 （一）生物制品大部分存在于生物组织或细胞中，要分离或提取这些产物或为提高提取率，进行生物组织与细胞破碎（obtrite of tissue and cell）过程是非常重要的。破碎细胞是为了破坏细胞壁，使细胞内容物有效的释放出来，获得有效的提取。破碎的方法有很多，按照是否存在外加作用力可分为机械法和非机械法两大类，其中机械法主要是靠剪切力来破碎细胞，包括高速匀浆破碎法、高速搅拌珠磨破碎法、超声波振荡破碎法，高强度剪切力有时可以使蛋白质变性。非机械法相对来说比较温和，细胞可能全部被破碎，或是细胞膜部分通透而释放出目标蛋白质等活性生物制品，包括渗透压冲击破碎法、反复冻融法、自溶法和酶解法等。非机械破碎法往往不能破坏DNA，从细胞中释放出来的DNA会发生聚合，大大增加液体的粘度。常用的细胞破碎方法包括以下几种。 1.磨切法 该法属于机械破碎方法，设备有组织捣碎仪、胶体磨、匀浆机、珠磨机、乳钵里（机）等。 2.压力发法 有渗透压法、高压法与减压法3种，高压法是用几百万至几千万帕压力反复冲击物料。减压法是对菌体缓缓加压，使气体溶入细胞，然后迅速减压使细胞破裂。 3.反复冻融法 该法是将细胞放在低温下冷冻，然后在温室中融化，如此反应多次，而使细胞壁破裂的细胞破碎技术。其原理主要有两点：一方面，在冷冻过程中会促使细胞膜疏水结构断裂，从而增加细胞的亲水性；另一方面，冷冻使细胞内的水结晶，形成冰晶粒，使细胞膨胀而破裂，于是细胞内容物释放出来。渗透压法仅适用于细胞壁较脆弱的细胞，或者细胞壁预先用酶处理，或者在培养过程中加入某些抑制剂，使细胞壁有缺陷，强度减弱。 4.超声波振荡破碎法 超声波破碎（ultrasonication）是当今应用较多的一种细胞破碎方法。该方法破碎效果较好，但由于局部发热，对活性有损失。其原理是当超声波达到20000C/s［即循环/秒（cycle/second）］（150W，20kHz）时，可使液体产生非常快速的振动，在液体中产生空穴效应而使细胞破碎。超声波破碎的效率与声频、声能、处理时间、细胞悬浮液的温度、pH、离子强度、细胞浓度及菌种类型等因素有关。 5.酶溶破碎法 是利用酶反应分解细胞壁上的特殊连接键，破坏细胞壁结构，进而达到破碎细胞使细胞内含物溶解出来的目的。分为外加酶法和自溶法。外加酶法，即在细胞悬浮液中加入一些酶使细胞壁