细胞样品RNA的抽提逆转录(RT)及实时定量PCR(qPCR)测定详细分析.pptxVIP

细胞样品RNA的抽提、逆转录(RT)及实时定量PCR（qPCR）测定;;实验目的;核 酸(nucleic acid) ;核酸的分类及分布;;DNA and RNA 有何不同;;DNA: 双链，稳定性高，可以保存很久，主要在核内。 功能较单一，主要发挥携带遗传信息的作用;RNA: 单链，稳定性差，容易形成二级结构 核、胞浆、线粒体、体液等都有，功能广泛。;双链DNA;;DNA中的嘧啶;RNA的量及类型却因细胞种类以及细胞状态的不同而有很大差异;RNA的种类和功能;;RNA抽提实验原理;;保证Trizol过量： 1、防止RNA降解； 2、以免PH值变中性，造成DNA溶解进入上层的水相； 3、影响蛋白质变性的效果，造成蛋白质的污染。;异丙醇沉淀，优点是容积小且速度快，主要沉淀DNA和大分子rRNA和mRNA，对5sRNA、tRNA及多糖、盐不产生沉淀。;RNA产物的鉴定;RNA电泳结果示意图;RNA电泳结果凝胶成像图;28 S;少说话，戴口罩、手套;操作注意事项;RNA纯化的??量决定了后续实验的成功与否;什么是RT-PCR/qPCR;RT-PCR/RT-qPCR;Applications of RT-PCR;分子生物学的中心法则;中心法则是绝对的吗？;RNA病毒（逆转录病毒）,如T细胞淋巴瘤病毒HTLV－I;Howard Temin proposed th