3.固定化生物催化剂反应过程动力学解说.ppt

3.1 固定化生物催化剂概论  酶的固定化 均相（水溶液）酶反应的缺点 分离难、费用高、影响质量 难以重复使用 酶易变性失活 固定化酶 优点：稳定性好，反复使用，连续操作，高纯度的产品，环境友好 缺点：酶损失，增加费用，非均相反应的内扩散影响 3.固定化方法: 通常采用的固定化方法为：载体结合法、交联法、包埋法等。 3.1.1.2 细胞的固定化 固定化细胞：当细胞受到物理、化学等因素的约束而被限制在一定空间内，但仍保留其催化活力并具有反复使用的特点的这种细胞。 根据细胞类型，它包括固定化微生物细胞，固定化动物细胞和固定化植物细胞 细胞的固定化方法：载体结合法，自聚集法和包埋法 自聚集法：利用细胞具有形成聚集体或絮凝物颗粒的特点，或是利用多聚电解质诱导形成细胞聚集体以实现细胞的固定化。由于它具有颗粒大尺寸的特点，导致它具有固定化细胞的某些特征。 对固定化细胞，存在着固定化细胞生物膜的厚度和细胞絮凝物的大小均随细胞生长而增加的现象。 (3) 最适温度和pH：最适温度增加,载体的性质使最适pH发生偏移。 (4)动力学常数：固定化使Km改变，尤其是载体的电负性与底物的是否有差别，若电荷相反，有利于吸附，Km减小。是有利的。 3.6.2 表观活化能 3.6.3 表观稳定性 固定化生物催化剂的活性稳定性包括本征稳定性和表观稳定性 表观稳定性:指存在扩散影响时固定生物催化剂的稳定性特征,这种稳定性仅能在反应和扩散相结合的理论中进行分析. 内外扩散影响同时存时对固定化酶失活速率的影响 7.化学抑制与扩散的负协同效应是指随着外扩散限制程度的增大，化学抑制的程度相对减小，外扩散的限制作用在一定程度上掩盖了化学抑制的影响。 8.改变固定化酶催化反应外扩散效应影响的方法。主要从Da考虑，提高底物浓度和体积传质系数（提高搅拌速度或提高反应流速）可减小Da，减少外扩散的影响；降低固定化最大反应速率也可以减少外扩散的影响。 3.4 内外扩散同时存在时的限制效应 无解析解，只有数值解 对一般的M-M方程用数值解求 Kobayashi经验方程（误差5%) 膜状a=b=1; 球状 a=2.6, b=0.8 3.3.6 表观梯勒模数法（Weisz’s模数) 一级动力学： 零级动力学： 图3.21　固定化酶　　与　　的关系曲线 书上图3-21,P113 Weisz判据： Φ0.3时，η＝1 Φ3时，内扩散影响变得非常明显 Φ10时，对一级动力学有η1＝1/φ；对零级动力学有η0≈2/φ 1.内外扩散同时存在时的有效因子 3.4内外扩散同时存在时的限制效应 传质速率＝以外表面底物浓度为基准的反应速率 以外表面底物浓度为基准的反应速率＝以主体溶液底物浓度为基准的反应速率 Biot准数（Bi）(表示内外扩散速率之间的关系) 引入Biot准数 [例3-7] 根据已知实验结果估计固定化酶催化反应的本征动力学参数和内扩散的影响。 假定反应本征动力学具有M－M方程的形式。为了估计固定化酶的扩散与本征动力学参数，现进行两组实验，一组用大颗粒半径为60μm,使其为内扩散控制；另一组用小颗粒半径为10μm，使其为动力学控制，两者均为球形固定化酶颗粒。根据底物浓度与反应速率关系作得E－H图。如例图3A，试根据图形和有关数据，估计参数 R 3.6 扩散影响下的表观动力学参数与稳定性 L-B E-H 一、对反应速率与浓度关系的影响 3.6.1 表观反应级数 对于n级反应 当内扩散限制严重时 扩散的结果使本征动力学反应级数n1的表观级数n*下降， 而使原n1的表观级数上升。 1.不考虑T对De的影响时 图3.30　固定化乙酰胆碱脂酶的活化能 2.考虑T对De和反应活化能的影响 可以得出各种限制效应的活化能的关系: E反应＞ E内扩散＞ E外扩散 内扩散对固定化酶失活速率的影响 球形M-M反应： 内扩散限制所导致的稳定参数 当无内扩散影响时： 当内扩散影响严重时： 失活遵循一级动力学： 表观稳定性提高,内扩散严重时,表观半衰期可提高一倍 因此可知:内外扩散均使表观稳定性增加 总结 3.1 固定化生物催化剂概论 简单介绍固定化酶和细胞的方法、酶固定化后活性和稳定性的变化、重点介绍 影响固定化生物催化剂特性的因素 1.通常采用的固定化方法为：载体结合法、交联法、包埋法等 2.细胞的固定化方法：载体结合法，自聚集法和包埋法 3.影响固定化酶动力学的因素有：空间效应（包括构象效应和位阻效应）、分配效应（包括亲水效应、疏水效应和静电效应）和扩散效应（包括外扩散效应和内扩散效应）。不同因素对酶动力学影响结果见下图：  3.2 外扩散对反应速率的限制效应 详细介绍外扩散产生的原因，外扩散对速度的影响，反应速度的求取，有效因子的定义、计