第二章 蛋白质化学浅析.ppt

诺奖获得者：钱永健、下村修、约翰森 GFP的不同颜色 Green-GFP blue-BFP：蓝色荧光蛋白 Cyan-CFP ：深蓝色荧光蛋白 Red-RFP：红色荧光蛋白 Yellow-YFP：黄色荧光蛋白 整体水平抗体生成技术 细胞工程抗体生成技术 基因工程抗体生成技术 多克隆抗体（抗血清） 单克隆抗体 嵌合抗体、改形抗体 “小型化抗体”（单链抗体） 组合抗体库技术 噬菌体抗体库技术 Ig基因转基因小鼠 抗体真核表达技术 抗体技术发展经历三个阶段 抗体技术 抗体 -a -b -c -d -a -b -c -d 抗原決定基 BALB/c a b b c d 传统抗体 (抗血清) 是所有抗体的混和 脾脏产生各种B细胞 免疫前要先 把抗原作 成乳剂 免疫 抗原 采血后得到传统抗血清 已建立小鼠 骨髓癌细胞株 由脾脏收集B细胞 抗原通常有多个抗原決定基 免疫后 的脾脏 约在两月內 注射五到八次 Ag X -d 细胞融合 -a -b -c -d Ag X Ag X’ ELISA HAT PEG Cell fusion Hybridoma cells 融合瘤细胞 d’ d a b c d a b c d’ + + + + + + + - X -d -c -b -a + - -d NS-1 骨 髓 癌 细 胞 B cell 分株培养筛选 筛选 单抗 传统抗体 (抗血清) 试验专一性 对 抗 原 的 反 应 无 法 分 辨 完 全 不 同 d 旧有抗原 d’ 新的抗原 小分子抗体 鼠单抗人源化 基因工程改造的抗体 药物设计新模式  HIV-蛋白酶抑制剂的设计 在对HIV-蛋白酶抑制剂的设计中，通过对该蛋白酶三维结构的研究，发现其具有一个二重旋转轴的对称性，进行分子对接模拟计算后设计了抑制剂，并最终得到了抗艾滋病药物Ritonavir SARS冠状病毒蛋白水解酶抑制剂的设计 SARS 爆发期间，我国科研人员根据SARS冠状病毒(SARS-CoV)蛋白水解酶(Mpro)的同源蛋白模拟结构 利用虚拟筛选平台从现有药物中筛选抗SARS化合物，从中发现具有抗精神分裂和抗炎作用的老药肉桂硫胺是SARS-CoV Mpro 的抑制剂，能明显抑制病毒颗粒的复制 蛋白质工程设计可以采用定点突变和体外分子定向进化两种方式对天然分子进行改造 定点突变需要知道蛋白的一级结构及编码序列，并根据蛋白质空间结构知识来设计突变位点 体外定向进化是在尚不知道蛋白质的空间结构，或者根据现有的蛋白质结构知识尚不能进行有效的定点突变时，借鉴实验室手段在体外模拟自然进化的过程，使基因发生大量变异，并定向选择出所需性质或功能 然而，定点突变技术只能对天然酶蛋白中少数的氨基酸残基进行替换，酶蛋白的高级结构基本维持不变，因而对酶功能的改造较为有限 同时，已有的结构与功能相互关系的信息远远不能满足当今人们对蛋白质新功能的要求，因此目前采用体外分子定向进化的方法来改造酶蛋白的研究越来越多，并已在短短几年内取得了令人瞩目的成就 定向进化 原理：在待进化基因的PCR扩增反应中，利用Taq DNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的性质，配合适当条件，以很低的比率向目的基因中随机引入突变，构建突变库，凭借定向的选择方法，选出所需性质的优化蛋白质，排除其他突变体 定向进化的基本规则：“获取你所筛选的突变体” 定向进化=随机突变+选择 与自然进化不同，前者是人为引发的，后者虽相当于环境，但只作用于突变后的分子群，起着选择某一方向的进化而排除其他方向突变的作用，整个进化过程完全是在人为控制下进行的 什么是蛋白质组？  蛋白质组是指“由一个细胞或一个组织的基因组所表达全部相应的蛋白质” 荧光染色的细胞内蛋白质 蛋白质组 基因组和蛋白质组有什么联系？ 遗传信息从DNA（基因）转变mRNA中间转载体，然后再合成各式各样的结构蛋白质和功能蛋白质，构成一种有机体，完成生命的功能 基因→ mRNA→蛋白质，三位一体，构成遗传信息的流程图，即传统的中心法则 一个基因并不只存在一个相应的蛋白质，可能会有几个，甚至几十个 什么情况下会有什么样的蛋白，不仅决定于基因，还与机体所处的周围环境以及机体本身的生理状态有关 1975年 双向凝胶电泳技术 1986年 第一个蛋白质序列数据库-SWISS PROT 1997年 出版了第一部蛋白质组学专著 2000年 发表一个生物体的完整蛋白质组 2001年 公布人类基因组框架图和序列图谱 蛋白质研究简史 二维凝胶电泳技术 (2DE) 又称双向电泳，蛋白质组学研究中的核心