第二章_培养基灭菌浅析.pptVIP

a．维持罐 维持罐如图5—8所示， 图5－8 维持罐结构 维持罐缺点： 维持罐直径比进料管直径大得多，培养基不能先进先出，返混较重，维持时间被迫延长，加剧了营养成分破坏。 例5-3: 若将例5—1中的培养基采用连续灭菌，灭菌温度为131oC，此温度下的灭菌速度常数为0.25 s—1，求灭菌保温时间。 由该例可见，灭菌温度升高10o C后采用连续灭菌则保温时间大为缩短。 当然，在维持罐内的物料会有返混，为保险起见，实际维持时间常取理论灭菌时间的3—5倍。 b．管式维持器 管式维持器常做成蛇管状，外面用保温材料包裹。 管式维持器原理： 培养基在管道内处于湍流区，流体各质点流速几乎相等，处于活塞流状态，返混值为零。 这样既保证达到灭菌要求，又最大限度地避免了营养成分的破坏。 (5)、降温 升降温快是培养基连续灭菌的重要特征之一。 为避免营养成分的破坏，培养基需要迅速降温至接近培养温度(40～45℃)。 现国内大多采用喷淋冷却器，也有的采用螺旋板换热器、板式换热器、真空冷却器等。 优 点 缺 点 连续 灭菌 1.高温短时灭菌，培养基 营养成分损失少。 2.发酵罐占用时间缩短， 利用率高。? 1.设备复杂，操作麻烦, 染菌机会多。 2.不适合含大量固体物 料的灭菌。 间歇 灭菌 1.设备要求低，不需另外 加热、冷却装置。 2.操作要求低，适合小批 量生产规模 3.适合含大量固体物料的 灭菌 1.培养基的营养物质损 失大，灭菌后培养基 质量下降 2.发酵罐的利用率较低 3.不适合大规模生产的 灭菌 （三）间歇灭菌与连续灭菌的比较 * * 培养基灭菌 保证纯种培养的具体措施： ① 、设备灭菌并确保无泄漏； ②、 培养基灭菌； ③ 、通入气体(如空气)先除菌； ④ 、确保纯种； ⑤ 、补料应经灭菌 1.化学试剂灭菌法 甲醛、乙醇或新洁尔灭、高锰酸钾等 适用范围：环境、皮肤及器械的表面消毒 2.射线灭菌法 3.干热灭菌法 电磁波、紫外线或放射性物质 适用范围：无菌室、接种箱 常用烘箱，灭菌条件：160℃下保温1h 适用范围：金属或玻璃器皿 4.湿热灭菌法 利用饱和蒸汽灭菌，条件：121℃，30min 适用范围：生产设备及培养基灭菌 5.过滤除菌法 利用过滤方法阻留微生物 适用范围：制备无菌空气 6.火焰灭菌法 火焰 适用范围：接种针、玻璃棒、三角瓶口 常用方法： 化学灭菌、射线灭菌、干热灭菌 、湿热灭菌 、过滤除菌 。 灭菌方法 四、 湿热灭菌 湿热灭菌：利用饱和水蒸气进行灭菌。蒸汽穿透力强、放出大量冷凝热，很容易使Pr凝固而杀灭微生物。 蒸汽价格低廉，来源方便，灭菌效果可靠。 适于：培养基、发酵设备及管道、实验器材灭菌。 蒸汽灭菌条件：121℃/30min。 一、 微生物的死亡速率与理论灭菌时间 湿热灭菌时，培养基中微生物受热死亡速率与残存微生物数量成正比： 第二节 培养基的湿热灭菌 N：培养基中活M数； τ：M受热时间，s； k：比死亡速率，s-1 若开始灭菌时(τ=0)，培养基中活微生物数为N0，式(5-1)积分则得： t = k No N - ln 或 N=N0e-kτ 5-2 5-3 此即：对数残留定律。 N为经τ时间灭菌后培养基中活菌数。 将存活率N/N0对时间τ在半对数坐标上绘图，斜率的绝对值为比死亡速率k，又称灭菌速度常数。 下图为大肠杆菌不同温度下的残留曲线，K值越大，微生物越易死亡。 二、 培养基的分批灭菌 概念：将配制好的培养基放在发酵罐或其他容器中，通入蒸汽将其和所用设备一起灭菌的操作过程，也称实罐灭菌。 实验室中普遍采用的灭菌锅灭菌也是分批灭菌。 优缺点： 工业上，培养基分批灭菌无需专门设备，设备投资少，灭菌效果可靠，灭菌用蒸汽要求低(0.2～0.3 MPa表压)，但灭菌温度低、时间长而对培养基成分破坏大，操作难于自动控制。 分批灭菌是中小型发酵罐常采用的一种培养基灭菌方法。 （1）、分批灭菌的操作 分