基质细胞衍生因子1SDF1α对大鼠颅脑损伤TBI影响和其作用机制的研究.pdfVIP

期问利●_r研成绩 68 ～ ～ ● ～～～ 一 69 ¨● ～ ～ 在致个 学谢人 简 介 一 70 ·中文论著摘要· 的影响及其作用机制的研究 目 的 SDF．1通过与其表面受体CXCR4特异性结合来发挥作用，其在正常脑中含量 很低。最初关于SDF．1的研究主要是在造血方面，现有的研究多集中在其对中枢 神经系统的发育和损伤的修复作用以及它在肿瘤中对肿瘤细胞增殖、侵袭的影响， 而鲜有文章研究其对凋亡的影响。在SDF．1对局部损伤组织的炎性因子影响研究 中，一些研究表明其有抗炎作用而又有研究表明其具有促进炎症作用，在这方面 存在很大的争议。有关SDF一1在颅脑损伤中的作用的报道表明损伤发生后SDF．1 能诱导脑组织中血管的生成，起到修复的作用。 针对以上现状，本研究首次从凋亡蛋白Caspase．3、P—6时以及凋亡抑制蛋白 法加以验证。通过检测ERK和NF—r．B通路的活化情况明确SDF．1在颅脑损伤中 到底是起到促进炎症还是抑制炎症的作用。以期为深入地探讨SDF—l对颅脑损伤 的修复作用机制，为颅脑损伤的治疗提供有力的实验基础。 材料与方法 一、基质细胞衍生因子．1(SDF．1)对大鼠颅脑损伤的影响 击于致伤垫，造成顶叶局部陛脑挫裂伤。造模成功30分后，给与SDF．1或SDF一1 抗体。颅脑损伤24小时后处死各组大鼠，取出脑组织，根据后续实验El的不同采 取不同方式收集样本。对于脑水肿的检测，大鼠处死后迅速取出脑组织，置于冰 上备用。对于血脑屏障完整性检测，在大鼠损伤后23h注射2％伊文思蓝，一小 时后灌注生理盐水去除血管内的伊文思蓝染料。对于其他检测，大叔灌注0．9％肝 素的预冷生理盐水250ml后，处死大鼠，液氮速冻后，置于_80度冰箱备用。 blue 2、伊文思蓝溢出(evansextravasation)法检测各组大鼠大脑皮层组织中， 血脑屏障完整性． Violet)染色法检测各组大鼠大脑皮层组织中神经元存活 3、甲苯酚紫(Cresyl 情况，并统计单个视野中存活的神经元数目。 二、SDF．1仅对大鼠颅脑损伤后细胞增殖、凋亡的影响 l、免疫组化检测各组大鼠大脑皮层组织细胞核抗原(PCNA)的表达情况。 2、TUNEL法检测各组大鼠大脑皮层组织细胞凋亡情况。 3、Western cleaved．PARP、Bcl一2和Bax的表达。 三、SDF．1伐对大鼠颅脑损伤后炎性因子，NO及胞内相关信号途 径分子的影响 因子的表达水平。 2、Griess反应法检测各组大鼠大脑皮层组织中NO的含量。 3、定时定量PCR和Westemblot检测各组大鼠大脑皮层组织中iNOS的表达 水平。 4、Western blot检测各组大鼠大脑皮层组织中AKT、p-AKT、p65NF—Kb、p-p65 NF．kB的表达水平。 实验结果 结果一： 1、大鼠遭受自由落体打击后：大鼠肢体抽搐，并呼吸抑制(约10—15s)，部 2 分大鼠出现前肢屈曲，后肢强直，证明大鼠颅脑损伤模型建模成功。 2、与假手术组对比：模型组与注射SDF．1a抗体组和注射生理盐水组EB溢 出量明显增加，SDF．1a抗体组比模型组脑含水量与EB溢出量略高，模型组与注 射生理盐水组相当。与模型组相比，SDF．1a组脑含水量与EB溢出量明显降低。 Violet)染色法检测各组大鼠大脑皮层组织中神经元存活 3、甲苯酚紫(Cresyl 结果表明：在sham组中，大脑皮层组织中神经元胞体相对较大，胞质浓密，含有 1到2个较大的核。而T