生物制药-第三章-动物细胞工程制药(1,2,3,4,5)讲义.pptx

第三章 动物细胞工程制药;第一节概 述;;;;;; 第二节 动物细胞的形态和生理特性; 1.贴壁细胞; 2.悬浮细胞; 3.兼性贴壁细胞;二、动物细胞的化学组成和代谢;;;;; 2.动物细胞的代谢;;三、动物细胞的生理特点; 1.细胞的分裂周期长; 2.细胞生长需贴附于基质，并有接触抑制现象; 3.正常二倍体细胞的生长寿命是有限的;; 4.动物细胞对周围环境十分敏感; 5.动物细胞对培养基的要求高; 6.动物细胞对蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同;;; 第三节 生产用动物细胞的要求和获得;;;; 二、生产用动物细胞的获得; 1.原代细胞; 2. 二倍体细胞系; 3.转化细胞系;; 4、融合细胞系;; (1)仙台病毒融合法; (2)聚乙二醇融合法; (3)电融合法; 5.重组工程细胞系; 三、基因工程细胞的构建和筛选; 1、真核细胞基因表达载体的构建;用杆状病毒作载体有许多优点：;;;;; 2基因载体的导入和高效表达工程细胞株的筛选 ;;; 四、常用生产用细胞的特性;;;;;;;;;;;;;;; 五、细胞库的建立;;;; 第四节 动物细胞的培养条件和培养基; 一、动物细胞的培养条件; (1)器材的清洗;(2)器材的消毒灭菌;; 2.水质; 3. pH;; 4.渗透压;5.温度; 6.空气;;? 二、动物细胞培养基的种类和组成;; 天然培养基; 2. 合成培养基; 氨基酸; (2) 维生素; (3) 糖类; (4) 无机盐;(5) 其他成分;;;;3. 无血清培养基; 目前已有一批无血清培养基问世(表3 - 8)，这些无血清培养基都是在上述的合成培养基内加入不同种类的添加剂所构成，添加剂大致有如下几类。;;;; 第五节 动物细胞培养的基本方法; 一、细胞分离; 2. 消化分离法; （1） 1%胰蛋白酶溶液的配制; （2） 0.02%EDTA溶液的配制; (3) 胰酶-柠檬酸盐配制; (4) 胰酶-EDTA溶液的配制;二、细胞计数; 自动细胞计数器计数; 2. 血球计数板计数;;常用的染色液有如下几种：; 3.结晶紫染色细胞核计数法; 4. MTT染色计数法; 三、细胞传代; 悬浮细胞的传代;2. 贴壁细胞的传代;; 四、细胞的冻存和复苏;;; 2.细胞的复苏