分离工程第二章.pptVIP

第一节  细胞分离 一、重力沉降 重力沉降是化工过程中常用的气固、液固和液液分离手段，在生物分离过程亦有一定程度应用。 以液固沉降为例 1、球形粒子的Stokes沉降速度 2.对于非球形粒子，可用当量直径代入计算沉降速度。再根据颗粒的形状系数对计算值进行校正。 颗粒形状系数定义为 3.当颗粒浓度较大时，颗粒间相互碰撞干扰，沉降速度比单一颗粒小。 4.菌体和动植物细胞的重力沉降简单易行。由于菌体细胞体积小，沉降速度很慢，实际应用时需加入中性盐或高分子絮凝剂（如聚丙烯酰胺或聚乙烯亚胺），提高沉降速度。 机理：中性盐可是菌体表面双电层排斥电位降低，有利于菌体凝聚。高分子絮凝剂使菌体之间架桥作用而形成较大凝聚颗粒。 二、离心沉降 离心沉降速度 2、离心分离法 （1）差速离心分级（Differential centrifugation 生化工业中最常用的离心分离法，细胞的分离为一级分级分离。实际应用中据实际物系的特点、分离目的和所需分离程度，选择适当的离心机转数和时间，可使料液中不同组分得到分级分离。 （2）密度梯度（区带）离心 差速区带离心：调配的密度梯度中的最大密度小于待分离的目标产物的密度。 离心操作中，料液中的各个组分在密度梯度中以不同的速度沉降，根据各个组分沉降系数不同的差别，形成各自的区带。 平衡区带离心：调配的介质密度梯度比差速区带离心的密度梯度大。 离心操作结果使料液中的高分子溶质在与其自身密度相等的溶剂密度处形成稳定的区带，区带中的溶质以该密度为中心，呈高斯分布。 可用于调配密度梯度的物质除蔗糖、聚蔗糖，还有CsCl （核酸的分离）和NaBr （脂蛋白的分离） 。 聚蔗糖的商品名称为Ficoll，是蔗糖和1-氯-2、3-环氧丙烷的高聚物，Mr 400000，需要高密度和低渗透压梯度时，可用Ficol代替蔗糖。 （3）离心分离设备 实验室主要使用离心管式转子离心机；生化上需用冷冻离心机；工业上较常用的有管式和碟片式两大类。 三、过滤 定义：利用多孔介质（如滤布）截留固体粒子，进行固液分离的方法。 过滤操作中，滤饼阻力是影响过滤速度的主要因素，因此一般在过滤前需对料液进行絮凝或凝聚等预处理，此外可添加助滤剂 如硅藻土）提高过滤速度。 3、过滤设备 生化工业常用的过滤制备主要有： 加压叶滤机 板框过滤机 回转真空过滤机 第二节 细胞破碎 许多生物产物在细胞培养过程中不能分泌到胞外，而保留在细胞内。 如一些胞内酶、部分外源基因表达产物和植物细胞产物等。这类生物产物在固液分离后，需对收集到的菌体或细胞进行细胞破碎（Cell disruption ，使目标产物释放到液相中。 除去细胞碎片后，再进行后续分离纯化操作。 一、细胞的结构 不同种类的细胞结构差别很大，破碎的难易程度不同： 植物细胞＞真菌（如酵母菌）＞革兰氏阳性细菌＞革兰氏阴性细菌＞动物细胞。 破碎细胞的目的就是使细胞壁和细胞膜受到不同程度的破坏或破碎，释放其中的目标产物。 二、细胞破碎原理 机械破碎的原理是细胞在机械作用力下受到压缩和剪切而破碎。细胞越小，所需压缩或剪切力越大，越难破碎。 化学破碎又称化学渗透，其原理是利用化学或生化试剂（酶）改变细胞壁或细胞膜结构，增大胞内物质的溶出速率；或者完全溶解细胞壁，形成原生质体后，在渗透压作用下使细胞膜破裂而释放胞内物质。 三、细胞破碎法 1、机械破碎法 （1）高压匀浆 破碎原理：主要利用细胞悬液在高压作用下液相剪切力以及细胞与固定表面的撞击力而使之破碎。 （2）珠磨破碎 破碎原理：利用在高速搅拌作用下，细胞和微球相互磨擦碰撞而破碎。 影响因素：主要有搅拌速度、细胞浓度、微球粒径、密度、填充率和接触时间等。 特点： 适用范围较广；但有效能量利用率很低，应充分考虑冷却系统的热交换能力； 影响破碎率的操作参数较多，过程优化设计较复杂。 珠粒径合适为好。破碎率与微珠直径的关系：微珠粒径/菌体 30~100间较合适。 （3）撞击破碎 破碎原理：细胞冷冻后成为易于破碎的刚性球体，高速撞击固定的撞击板使其破碎。 特点： 细胞破碎均匀；可通过调节载气压力控制细胞破碎程度； 适用于细胞器（如线粒体、叶绿体）的回收。 间歇、连续操作均可，适用于大多数微生物细胞和植物细胞破碎。 （4）超声波破碎 破碎原理：超声波作用下液体发生空化作用，产生极大的冲击波和剪切力，使细胞破碎。 影响因素：细胞种类、浓度和超声波的能量等。 特点：它是很强烈的破碎方法；适用范围广；但有效能量利用率极低，对冷却的要求相当苛刻，故不易放大，多在实验室使用。 2、化学破碎法 （1）化学试剂处理 破碎原理：用酸碱、表面活性剂、螯合剂、有机溶剂或变性剂等处理细胞，增大细胞壁或细胞膜的通透性，或者降低胞内物质间相互作用，