第7章吸光光度法论述.ppt

第7章 吸光光度法 7.1 概述 7.2 吸光光度法基本原理 7.3 分光光度计 7.4 显色反应及影响因素 7.5 光度分析法的设计 7.6 吸光光度法的误差 7.7 常用的吸光光度法 7.8 吸光光度法的应用 7.1 概述 吸收光谱 发射光谱 散射光谱 7.2 吸光光度法基本原理 1 吸收光谱产生的原因 光:一种电磁波,波粒二象性 吸收光谱曲线：物质在不同波长下吸收光的强度大小 A～l关系 最大吸收波长 lmax：光吸收最大处的波长 4 朗伯-比尔定律 灵敏度表示方法 摩尔吸光系数 e 吸光度的加和性 1 分光光度计的组成 常用光源 单色器 作用:产生单色光 常用的单色器：棱镜和光栅 检测器 作用：接收透射光，并将光信号转化为电信号 常用检测器： 光电管 光电倍增管 光二极管阵列 要求： a. 选择性好 b. 灵敏度高 (ε104) c. 产物的化学组成稳定 d. 化学性质稳定 e. 反应和产物有明显的颜色差别 (?l60nm) 2 测定浓度控制 控制浓度 吸光度A：0.2～0.8 减少测量误差 3 参比溶液选择 仪器调零 消除吸收池壁和溶液对入射光的反射 扣除干扰 试剂空白 试样空白 褪色空白 4 标准曲线制作 理论基础：朗伯-比尔定律 相同条件下 测定不同浓度标准溶液的吸光度A A～c 作图 7.6 吸光光度法的误差 非单色光引起的偏移 物理化学因素：非均匀介质及化学反应 吸光度测量的误差 对朗伯-比尔定律的偏移 1 非单色光引起的偏移 复合光由l1和l2组成，对于浓度不同的溶液a和b,引起的吸光度的偏差不一样，浓度大，复合光引起的误差大，故在高浓度时线性关系向下弯曲。 非均匀介质 胶体，悬浮、乳浊等对光产生散射，使实测吸光度增加，导致线性关系上弯 2 物理化学因素 离解、缔合、异构等 如：Cr2O72-+H2O-=2HCrO4-=2H++2CrO42- PAR的偶氮－醌腙式 化学反应 吸光度标尺刻度不均匀 3 吸光度测量的误差 A＝0.434 ，T＝36. 8% 时，测量的相对误差最小 A=0.2~0.8, T=15~65%，相对误差4% dc/c= dA/A=dT/TlnT Er=dc/c×100％= dA/A×100％=dT/TlnT×100％ 令ST=0.01,计算T不同值时的Sc/c，当TlnT对T进行微分时，其值为零时，Sc/c最小，此时T=0.368。 1.示差吸光光度法 目的：提高光度分析的准确度和精密度 解决高(低)浓度组分(i.e. A在0.2~0.8以外)问题 分类：高吸光度差示法、低吸光度差示法、 精密差示吸光度法 特点： 以标准溶液作空白 原理： A相对 = ?A = ?bcx- ?bc0= ?b? c 准确度：读数标尺扩展, 相对误差减少, c0愈接近cx, 准确度提高愈显著 7.7 常用的吸光光度法 例：硫脲还原－硫氰酸盐比色法测定钢铁中的钼。酸溶，硫酸－高氯酸介质中，硫脲还原铁（III）为铁(II),除干扰，还原钼（VI）为五价，2.00mg/100ml的钼标准溶液为参比溶液，用2.00-2.30mg/100ml的钼标准溶液，绘制工作曲线和测定样品溶液的吸光度,480nm测定A。 2.双波长吸光光度法 目的：解决浑浊样品光度分析 消除背景吸收的干扰 多组分同时检测 原理： ? A = Al1-Al2 = （?l1- ?l2）b c 波长对的选择： a.等吸光度点法，b.系数倍率法 吸光光度法：分子光谱分析法的一种，又称分光光度法，属于分子吸收光谱分析方法 基于外层电子跃迁 分子光谱 原子光谱 1～1000m 无线电波 0.1~100cm 微波 5.0~1000um 远红外光 2.5~5.0um 中红外光 0.75~2.5um 近红外光 400~750nm 可见光 200~400nm 近紫外光 10~200nm 远紫外光 0.1~10nm X射线 波长范围 光谱名称 当光子的能量与分子的?E匹配时，就会吸收光子 ?E=hu=hc/l a 跃迁类型 价电子跃迁：σ→σ*, π→π*; n→σ*, n→π* ?E (h?) 顺序: n→π*π→π