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流式细胞术的样品制备 2010年04月13日 星期二 02:03 流式细胞术的实验检测对象是单细胞悬液，因此需把样品制备成细胞悬液，细胞浓度为 105 ～ 107 个／ ml 。制备成的单细胞悬液经荧光或免疫荧光标记即可上机检测。样本制备的基本原则： 1. 使各种液体和悬浮细胞样本新鲜，尽快完成样本制备和检测； 2. 针对不同的细胞样本进行适当洗涤、酶消化或 EDTA 处理，以清除杂质，使粘附的细胞彼此分离而形成单细胞状态； 3. 对新鲜实体瘤组织可选用或联用酶消化法，机械打散法和化学分散法来获得足够数量的单细胞悬液； 4. 对石蜡包埋组织应先切成若干 40-50 μ m 厚的蜡片，经二甲苯脱蜡到水后，再用前述方法制备单细胞悬液； 5. 单细胞悬液的细胞数不应少于 107 个 /ml 。一、新鲜实体组织样本的制备（ 一 ） 酶处理法 此法是实体组织分散为单个细胞的主要方法。由于不同酶对细胞内和细胞间不同组分有特异消化作用，所以应根据所用组织类型确定使用酶的种类。此外，乙二胺四乙酸 (EDTA) 能结合组织中的二价钙离子和镁离子，而二价钙离子和镁离子有维持细胞表面完整性和维持细胞间质结构的作用，因此，几种酶和 EDTA 联合使用有助于充分消化实体组织，提高细胞产出效率。下面仅介绍组织消化的一般过程，对于每种组织消化时所用的具体步骤需参考该组织细胞培养时的消化方法。