2009福建-高液相色谱.ppt

高效液相色谱法及其应用High Performance Liquid Chromatography 第二军医大学药学院 闻俊 分离性能好 流动相可选择范围宽 色谱柱可反复使用 适用范围广、分析速度快、选择性好、灵敏度高、样品用量少、安全 可根据被检样品的理化特性搭配适当的检测器等优点 中国药典法定对一些中药活性成分检测的、成熟的色谱分析方法，近年广泛用于中药药效学和药动学研究。 离子化程度较小 离子化程度较大 完全离子化 采用叔丁基遮蔽硅羟基的色谱填料 采用单碳封尾技术的色谱填料 反相整体柱液相色谱 整体柱(Monolithic)的特点 通过一次聚合老化后而得到的高纯度硅胶柱 含有两种不同大小的孔隙结构，直径为13nm的微孔和直径为2μm左右的中孔。2μm的中孔作为流通孔道可以方便的使待测组分跟随流动相到达柱内活性表面进行分离；微孔所形成的表面积大约为300 m2/g，保证了有效的分析效率 整体柱的特点 整体柱分离因素考察 Poor retention of polar compounds? 增加极性化合物在色谱柱上的保留 溶剂极性 溶剂强度——洗脱能力 反相色谱：溶剂极性固定相极性有机溶剂（甲醇、乙腈）调节溶剂极性极性越小，有机溶剂比例越大，洗脱能力越强→色谱分离能力下降 高压输液泵基本要求 输出压力高且平稳、脉动小，最高压力500kg/cm2 流量稳定，（精度?