生物制药技术介绍.ppt

第二章 关于生物制药技术 第一节 生物制药技术概论 第二节 原生质体融合技术 第一节 生物制药技术概论 一：酶蛋白抑制剂二：基因工程药物三：动物细胞基因在植物中的表达四：基因重组疫苗 五：基因治疗药物 现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程四大类。 基因工程药物又涉及到酶蛋白抑制剂、基因重组疫苗、单克隆抗体、基因治疗药物。 第一节 生物制药技术概论 一：从DNA→mRNA→Pr 二：细胞破碎技术 三：提取技术 四：分离纯化技术 五：灭菌技术 六：干燥技术 七：基因工程原理 一：从DNA→mRNA→Pr 1：DNA的半保留复制 2：DNA转录成mRNA 3：mRNA逆转录成DNA 4：mRNA转译成蛋白质 5：蛋白质在细胞内的加工和修饰 二：细胞破碎技术 （一）物理方法 （二）化学方法 （三）新型技术和方法 （一）物理方法 1：研磨法----细胞在玻璃球、或者钢球之间被碾碎。 2：捣碎法----在韦林氏捣碎机中，细胞被彻底捣碎。 3：高压匀浆法----细胞被强近性地通过小孔而剪碎。 4：超声波破碎法----利用超声波的空穴作用来破碎细胞。 5：快速冰冻融化法---- （二）化学方法 1：渗透冲击法----在细胞液中加入2倍量的纯水，由于渗透作用，细胞外的水分进入细胞内，导致细胞膜胀破，而将内含物释放出来。 2：干燥处理法---- 3：自溶法---- 4：酶处理法----多采用溶菌酶进行处理。此外，还有链霉菌酶、白细胞酶C也可用于进行酶处理。 5：表面活性剂增溶溶解法----采用洗涤剂破坏细胞壁，使内含物释放出来。常用的洗涤剂有：（1）十二烷基苯磺酸钠阴离子洗涤剂，（2）含有铵盐、或者氯化十八烷基三甲基季铵盐的阳离子洗涤剂，（3）脂肪醇聚氧乙烯醚的非离子型洗涤剂。 6：噬菌体作用法---- 7：电离辐射法---- （三）新型技术和方法 1：激光破碎法 2：冷冻喷射法 3：高速相向流撞击法 三：提取技术 1：盐析法2：有机溶剂分级沉淀法3：等电点沉淀法4：结晶和重结晶法5：酶解法6：萃取法（本章节重点讲解）7：透析法8：吸附法9：过滤技术 萃取法 （1）液-液萃取：萃取剂是液体，含有目标产物的原料也是液体 以萃取剂的种类和形式分：有机溶剂萃取、双水相萃取、液膜萃取、反胶束萃取 （2）化学反应萃取：萃取剂和溶质之间发生化学反应 （3）浸取 （4）超临界流体萃取 （1）液-液萃取 是利用一种溶剂将生物产品从发酵液中提取出来的过程。 萃取设备有离心萃取器： 连续微分接触式离心萃取机、 逐级接触式离心萃取机 有机溶剂萃取用于青霉素G、红霉素、四环素、氨基酸的提取 （2）化学反应萃取 （3）其它萃取技术 液膜萃取 反胶团萃取：极性核，稳定蛋白质 电场强化萃取 超临界萃取： 凝胶萃取 05SFT-150超临界萃取反应仪超临界流体具有液体和气体的双重特性，促进高效分离 （4）双水相萃取 由于生物大分子在加入有机相之后常常会失活，因此出现了双水相萃取技术。如用聚乙二醇（PEG）和葡聚糖（Dex），在水中可以形成密度不同的二相。这二相之间互相不溶混，同时二相中的水溶液均超过70%。所以称之为双水相。能构成双水相还有聚乙二醇和其他盐双水相萃取的回收率一般在80-90%之间，其特点是清除细胞碎片的能力较强。另外，由于聚乙二醇（PEG）和葡聚糖（SephaDex）对蛋白质很稳定，即使在常温下进行操作也不会导致蛋白质失活。 实例： 聚乙二醇/硫酸铵双水相体系提取淀粉酶和蛋白酶，收率高达90%。 聚乙二醇-4000/磷酸酯从 E.coli 提取人生长激素，聚乙二醇/磷酸盐提取α-1-干扰素和β-干扰素。 金属亲和双水相萃取、双水相萃取-电泳技术、羟基纤维素取代聚乙二醇 四：分离纯化技术 （一）：膜分离技术 （二）：层析技术 （三）：电泳技术 （一）：膜分离技术 1：渗透法 2：反渗透法 3：超滤技术 4：电渗析法 5：多孔陶瓷膜分离法 6：渗透汽化法 3：超滤技术 （1）微滤法，其滤膜的孔径为0.05—2.0um之间，可阻留分子量为20-100万的物质，所需要的压力在0.1Mpa以下，适用于细菌、微粒的过滤， （2）超滤法，也称为错流过滤，其滤膜的孔径为0.0015—0.20um之间，可阻留分子量为3-50万的物质，所需要的压力在0.1--0.3Mpa，适用于大分子蛋白质与小分子有机物的分离， （3）纳滤法，其膜孔径为纳米级细孔，能截流的最小分子为1nm，截留分子量为200—1000。所需要的压力在1.50Mpa。可用于分子量相差无几的氨基酸之间的分离。 （二）：层析技术 层析技术用于目的产品的高效分离和纯化。 根据层析所使用的介质不