实验1大肠杆菌的培养和分离介绍.pptVIP

目录 实验1 大肠杆菌的培养和分离 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 实验4 果汁中的果胶和果胶酶 实验6 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解 作用的检测 实验8 果酒及果醋的制作 实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定 细胞壁 结构特点：坚韧且有弹性 细胞壁有哪些功能？ ①固定细胞外形； 细菌的外形与大小 细菌：单细胞不分枝的原核微生物。细胞微小而透明，通常用适当染料染色后显微镜观察 影响微生物生长的环境因素 3、氧 培养基 液体培养基：增菌 固体培养基：纯化，增菌 半固体培养基：动力检测，保种 选择培养基 无菌操作 了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。 一、实验目标： 掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。 无菌技术的操作。 二、实验重点和难点： 三、技能目标： （一）培养基的配置与灭菌 取2个250ml的三角瓶中分别装入50mlLB液体培养基和50mlLB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜，牛皮纸包装后高压锅灭菌15min。 LB液体培养基——细菌的扩大培养 LB固体培养基——细菌的划线分离 封口膜：既通气又不使菌进入 （二）倒平板 灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。 倒 平 板 操 作 ① ② ③ ④ 注意事项： 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板 2.灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒 3.操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作. 4.需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌 5.平板冷凝后，要将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染. （三）大肠杆菌的扩大培养 将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中,使其在37℃摇床培养12小时。 注意事项: 1.火焰旁从斜面上用接种环取菌; 2.取菌前接种环要用酒精灯灼烧 灭菌,冷却后方能取菌; 3.取菌后封口膜和棉塞复原. 接种方法 （四）大肠杆菌的划线分离 划线分离法和涂布分离法 划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。 注意事项: 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. 2.划线首尾不能相接 3.划线后,培养皿倒置培养12~24h 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上. * * * 微生物 无细胞结构：病毒 有细胞结构 原核生物 真核生物 细菌 放线菌 蓝藻 支原体 真菌 原生生物 微生物：一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称． 所有的细菌所共有的基本结构有哪些？ 某些细菌所具有的特殊结构有哪些？ （拟核） 基本结构 特殊结构 ②保护细胞免受外力的损伤； ③阻拦大分子物质进入细胞； ④使细胞具有致病性及对 噬菌体的敏感性。 伤寒杆菌细胞壁中含毒素 细胞壁的成分？ 肽聚糖 贮藏性颗粒 质粒 核糖体 基质 拟核 细 胞 质 细胞膜 细胞壁 功能或应用 化学本质 结构 主要是肽聚糖 保护和维持细胞形状等 同真核生物 同真核生物 多种成分 新陈代谢的主要场所 小型DNA分子 同真核生物 同真核生物 控制细菌的抗药性、 固氮、抗生素生成 多种成分 贮藏营养物质或代谢废物，如淀粉粒、硫粒 大型环