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第一章绪 论 绝大多数抗生素生物合成基因成簇存在，抗性基因也是基因簇的一部分，即与合成基因连锁，基因簇中往往有调节基因，一种丝状细菌贝氏硫杆菌种（Vitreoscilla）的血红蛋白（VHb）基因克隆到大肠杆菌和放线菌体内，即促进有氧代谢和菌体生长，又可以促进抗生素的生物合成。 初级代谢：在菌体的迟延期和对数生长期产生的代谢产物：氨基酸、蛋白质、核苷酸、核酸、酶类、糖类、脂类是生命物质的基本构建材料，是菌体的初级代谢产物。 次级代谢：在微生物的生命周期的静止期，甚至是衰亡初期，许多微生物能够合成在生长期不合成或者合成很少的一类物质，这些物质对微生物的正常生活没有明显的影响，如抗生素、酶类、毒素、生物碱、植物生长素等，初级代谢产物或中间体是次级代谢产物合成的前体或者起始物。 发酵中的物理化学生物学参数：菌体形态、浓度、各种基质浓度、溶解氧浓度、发酵液的PH、发酵液浓度、培养温度、通风量、排气中二氧化碳的含量、发酵产物浓度等 第二章菌种选育理论 正常条件下，菌种依靠自身代谢调节系统，趋向快速生长核繁殖，发酵工业需要微生物能够积累大量的代谢产物。但前选育的基本内容：根据菌种自然变异进行自然选育核人工诱变育种，然后按照工业要求筛选。 第一节 自然选育 自然选育：微生物在一定条件下产生自发突变，经过分离、筛选，排除衰退菌株，从中选择维持原有生产水平大的菌株。一般在生产中主要用来纯化核复壮，以便稳定生产。突变株往往是代谢调节失控的菌株，活力差，遗传性不稳定 一 菌种退化变异的原因 1 遗传基因型的分离 抗生素产生菌多位放线菌核丝状真菌，菌丝体为多细胞组成，但是细胞中细胞核数量不等，因而遗传物质的多样化核复杂性导致不同遗传型的出现。 2 自发突变的结果 突变原因：a 砂土管中长期保存b菌种连续传代c细胞自身代谢产生诱变物质dDNA中增变基因的存在诱发突变e染色体上的死亡基因 3 经诱变剂处理后的退化变异 a未发生基因突变的细胞逐渐在数量上占优势b突变发生在无意义链上，在遗传信息传递中丢失c环境诱发低产突变株的繁殖，在数量上占有优势。 二 自然选育的方法 生产斜面－单孢子悬浮液－分离出单菌落－初筛斜面－摇瓶初选－高产菌株－砂土管菌种－斜面种子－摇瓶复筛－高产纯化株－生产试验或进一步选育 第二节 诱变育种 包括：出发菌株的选择、诱变处理、筛选突变株 一 突变诱发过程 前突变：诱变剂造成DNA分子的某一个位置的结构改变，前突变可以通过影响DNA复制而成为真正突变，也可以修复还原。 1诱变剂接触DNA分子之前（通过细胞质、细胞组分等可与诱变剂作用）转录状态的基因容易诱变。 2 DNA损伤的修复a光复活修复b切补修复c重组修复，不切除胸腺嘧啶二聚体的情况下修复d SOS修复系统e DNA多聚酶的校正作用 3从前突变到突变 诱变前后的处理影响诱变效果（与修复有关的酶活性及诱变目的基因处于活化状态） 4 从突变到突变型 表型的改变落后于基因型的改变――表型延迟 a 分离性迟延，基因诱变后不纯，突变基因属于隐性基因，需要复制分离纯化，才表达性状 b 生理性迟延 新表型等到原有基因型的产物稀释到某一程度才能表现 二 诱变育种的方案设计 1 制定筛选目标 ：生长速度快、产孢子多、消除无益成分、能利用廉价原料、适应泡沫多，温度变化等 2 制定筛选方案 三 突变的诱发 1 出发菌株的选择。1）选择纯种 选择工业生产中发酵产量稳定的 2）性状优良（孢子数、色素、生长速度、代谢速度） 3）对诱变剂敏感 2 诱变剂的选择 对于遗传不稳定的菌株选择温和的诱变剂，对于遗传稳定的菌株采用强烈的、不常用的、广谱的诱变剂。紫外线――作用于DNA分子的嘧啶碱基；亚硝酸――作用于DNA分子的嘌呤碱基，二者混合用诱变效果好。诱变剂量要适中。 3 影响诱变效果的因素 生理状态、诱变后的培养条件 温度 氧气 搅拌等 四 突变菌株的筛选 1 随机筛选 诱变后，进行平板分离，随机挑选菌落 摇瓶筛选2） 琼脂块筛选 2 理性化筛选 1 初级代谢产物高产菌株的筛选 打破微生物原有的反馈调节系统1)降低终产物的浓度①筛选终产物营养缺陷型②筛选细胞膜透性改变的突变株，大量分泌终产物，降低细胞内部终产物浓度，从而避免终产物反馈调节。2）筛选抗反馈调节的突变株 2 次级代谢产物（主要是抗生素）高产菌株的筛选 次级代谢是为了避免在初级代谢中某些中间产物积累造成的不利作用而产生的一类有利于生存的代谢类型。 利用营养缺陷型筛选 当次级和初级代谢在同一分支合成途径时，筛选初级代谢产物的营养缺陷型常可以使相应的次级代谢产物增产。脂肪酸营养缺陷型可以增产四环素，设计流程：先进行摇瓶发酵试