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蓝耳（TJM-F92）资料整理1． 蓝耳疫苗：活疫苗：– 经典PRRS疫苗：• CH-1R• R98株– 高致病性PRRS活疫苗：• 天津株（TJM-F92）• 湖南株（HuN4-F112株）• 江西株（JXA1-R株）2．高致病PRRS活疫苗生产厂家江西株（JXA1-R株）：– 中牧成都厂，广东大华农，扬州威克，广东永顺，武汉中博等。湖南株（HuN4-F112）株：– 哈尔滨维科，上海海利，吉林正业，黑龙江一厂。天津株（TJM-F92）：– 北京华威特，吉林国原，新疆天康，青岛易邦，山西隆克尔。3．疫苗毒株安全与效力关系：病毒细胞传代次数5代20代40代60代90代120代病毒效价(TCID50/ml)4.55.06.57.57.57.5发病率(%)10050301000死亡率(安全护率1009590858070安全性低------------------------------高有效性高------------------------------低4．PRRSV传代致弱机理：TJM-F92株（蓝特威）疫苗致弱机理– 传代病毒：PRRSVTJ株F3（强毒）– 传代细胞：Marc-145细胞– 强毒共传代92代做为疫苗原始种毒– 病毒纯化：每5-10代进行一次噬斑克隆纯化JXA1株（大华农）疫苗致弱机理– 传代病毒：PRRSVJX株F5（强毒）– 传代细胞：Marc-145细胞– 强毒共传代90代做为疫苗原始种毒JXA1株（中牧）疫苗致弱机理– 传代病毒：PRRSVJX株F5（强毒）– 传代细胞：Marc-145细胞– 强毒共传代90代做为疫苗原始种毒5．TJ株不同代次Nsp2基因缺失电泳图：解释：F3和F16大小为1004bp；F18代后Nsp2基因序列缺失360核苷酸，片段大小约644bp左右，说明F17代克隆噬斑后选择一株基因缺失毒株。6．TJ株不同代次Nsp2序列PCR扩增结果：解释：F3和F17大小为1004bp；F18代后Nsp2基因序列缺失360核苷酸，片段大小约644bp左右，说明F17代克隆噬斑后选择一株基因缺失毒株。7．PRRSVTJ株F3、F15、F18和TJM-F92株接种试验动物体温变化曲线8．病毒分离结果（病毒血症天数）：Group攻击后天数2d4d6d8d10d12d14d16d18d20d空白对照0/30/30/30/30/30/30/30/30/30/3F3强毒3/33/32/32/32/22/21/11/11/11/1F15缺失前2/33/33/33/33/33/33/33/33/32/3F18缺失后1/33/33/32/33/33/31/30/30/30/3F92疫苗株1/33/33/33/33/31/32/30/30/30/3解释：F3强毒接种后，病毒血症全程都有，说明维持时间最长，并且致死率最高。F15较强毒接种后，病毒血症全程都有，说明维持时间较长，并且致死率较高。F18较弱毒接种后，病毒血症仅十来天左右，说明维持时间较短，并且致死率较低。F92弱毒接种后，病毒血症仅十来天左右，说明维持时间最短，并且致死率最低。9．不同代次病毒血症和死亡率分组毒血症(攻击后天数）死亡率空白对照00/3F3强毒202/3F15缺失前≥200/3F18缺失后≤140/3F92疫苗株≤140/310．TJM-F92株Nsp2基因缺失示意图11．TJM-F92株疫苗基因缺失意义• 基因缺失标记疫苗，是国际疫苗发展趋势；• Nsp2基因缺失是病毒毒力减弱部分分子学基础，已得到国际上确认；• 更重要是不易发生毒力返强；• Nsp2基因缺失可用于鉴别诊断，用于种群净化，区域净化– RT-PCR鉴别诊断可用于病原鉴别，简单易操作，可在基层兽医实验室普及，结果判定直观，不易出现误差– ELISA试剂盒可鉴别疫苗免疫和感染抗体，操作简单，使用常规仪器设备，结果判定客观。12．蓝耳疫苗安全研究• 返强试验研究• 其他安全研究：– 单剂量单次、重复安全性试验– 超剂量安全性试验（10个剂量）– 对非试用日龄猪的安全性试验– 对妊娠母猪的安全性试验– 不同品种猪安全性试验– 水平传播试验• 评价标准：动物增重、体温、临床症状、死亡、怀孕母猪产子状况等；13．蓝耳疫苗安全性检验结果1.所有接种疫苗动物，包括适龄和非适龄动物，不同品种动物，怀孕动物，和不同剂量，包括单剂量、重复、10倍剂量体温正常，无任何临床副反应，增重与对照无差异；2.疫苗接种母猪产仔情况正常，未见流产及死胎等不良反应，仔猪未分离到PRRS病毒；14．TJM株最高代次（F98）疫苗效力研究• 疫苗：PRRSTJM株（批次：004-169)– 免疫剂量：104.6TCID50/ml– 细胞代次：Marc-145细胞F21代（细胞最高代次）–