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脂肪酶
三种脂肪酶活力测定方法的比较研究 姓 名：张晶鑫 专 业:生物工程2班 指导教师:王刚 一、前言 二、实验材料 三、实验方法 四、实验结果 五、结果与讨论 主要内容 脂肪酶在生产、科研中应用广泛，广泛用在造纸业、食品业、药业、农业等等。 由于脂肪酶活力测定方法的多样性，脂肪酶活力单位定义不统一，因此从市场中购得的脂肪酶相互间无法进行正常的活力比较。本实验就酸碱滴定法、铜皂法、对硝基苯酚法三种常用方法进行了比较。 一、前言 二、实验材料 榨汁机，分析天平，碱性滴定管， 分光光度计，pH计，离心机，恒温水浴锅 脂肪酶，生物工程研究室提供 脂肪酶活力单位定义：在一定条件下，每分钟释放出1μmoL脂肪酸的酶的量定义为一个脂肪酶活力单位（U）。 脂肪酶活力单位 三、实验方法 （一）、滴定法 底物溶液（乳化液）配制:量取4%PVA溶液150mL,加入橄榄油50mL，用榨汁机处理3min，现配现用。 脂肪酶溶液配制:配制pH值为7.38的0.5mg/mL脂肪酶溶液。 二 、铜皂法 1、脂肪酸吸光度标准曲线的绘制 配制一系列不同浓度的油酸溶液，分别取4mL油酸溶液置于锥形瓶中，加入1mL显色剂，均匀搅拌3min，油酸分子与Cu2+生成绿色的络合物，4000r/min离心10min后取上层有机相在710nm处测定吸光度。 （三）、对硝基苯酚法 底物溶液配制:量取对硝基苯酚棕榈酸酯 p-NPP 0.0378g，加入Triton X-100 1mL，用50mmoL/L Tris-HCL缓冲液（pH值8.0）定容100mmL。 1、溶液配制准备 2、p-NP吸光度标准曲线的绘制 配制p-NP标准溶液 0.03mg/mL ；将p-NP标准溶液稀释成适当的梯度，在405nm下分别测定吸光度，绘制吸光度一浓度关系曲线。 四、实验结果 脂肪酸浓度与OD值标准曲线图 对硝基苯酚浓度与OD值标准曲线图 三种方法所测酶活及相对标准差 2.812 0.2673 0.2653 0.2769 对硝基苯酚法 1.114 26.35 25.53 26.02 铜皂法 4.953 19.23 16.98 18.32 滴定法 相对标 准差 酶活3 U 酶活2 U 酶活1 U 三种方法所耗时间比较 33 14 10 9 对硝基苯酚法 38 20 10 8 铜皂法 28 6 10 12 滴定法 总时间 （min） 终止及处理时间 （min） 反应时间 （min） 准备时间 （min） 五、结果与讨论 测定速度： 滴定法 铜皂法 对硝基苯酚法 稳定性： 铜皂法 对硝基苯酚法 滴定法 灵敏度： 对硝基苯酚法 铜皂法 滴定法 实际应用中，可根据不同需要选择测定方法。
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