2_第十四章 高效液相色谱法2009.ppt

由于液体的扩散性比气体的小105倍，因此，溶质在液相中的传质速率慢，柱外效应就显得特别重要；而在气相色谱中，柱外区域扩张可以忽略不计。 液相色谱中制备样品简单，回收样品也比较容易，而且回收是定量的，适合于大量制备。 但液相色谱尚缺乏通用的检测器，仪器比较复杂，价格昂贵。在实际应用中，这两种色谱技术是互相补充的。 进样系统 高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出。柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。柱外展宽可分柱前和柱后展宽。进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严。 检测器 检测器是液相色谱仪的关键部件之一。对检测器的要求是：灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。 在液相色谱中，有两种类型的检测器，一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应。属于此类检测器的有紫外、荧光、电化学检测器等；另一类是总体检测器，它对试样和洗脱液总的物理和化学性质响应。属于此类检测器有示差折光检测器等。 液液色谱 固定相由载体和固定液组成。常用的载体有下列几类： （1）表面多孔型载体（薄壳型微珠载体），由直径为30 ~ 40?m的实心玻璃球和厚度约为1 ~ 2 ?m的多孔性外层所组成。 （2）全多孔型载体，由硅胶、硅藻土等材料制成，直径30 ~ 50 ?m的多孔型颗粒。 （3）全多孔型微粒载体，由nm级的硅胶微粒堆积而成，又称堆积硅珠。这种载体粒度为5 ~ 10 ?m。由于颗粒小，所以柱效高，是目前使用最广泛的一种载体。 液—固色谱法 固定相是固体吸附剂。吸附剂是一些多孔的固体颗粒物质，存在一些分散的具有表面活性的 吸附中心 。根据各组分在固定相上的吸附能力的差异进行分离。 吸附剂吸附试样的能力，主要取决于吸附剂的比表面积和理化性质，试样的组成和结构以及洗脱液的性质等。组分与吸附剂的性质相似时；当组分分子结构与吸附剂表面活性中心的刚性几何结构相适应时，易于吸附，呈现高的保留值。吸附色谱成为分离几何异构体的有效手段；不同的官能团具有不同的吸附能，因此，吸附色谱可按族分离化合物。 吸附色谱对同系物没有选择性（即对分子量的选择性小），不能用该法分离分子量不同的化合物。 液—固色谱法 固定相 采用的固体吸附剂按其性质可分为极性和非极性两种类型。极性吸附剂包括硅胶、氧化铝、氧化镁、硅酸镁、分子筛及聚酰胺等。非极性吸附剂最常见的是活性炭。 极性吸附剂可进一步分为酸性吸附剂和碱性吸附剂。酸性吸附剂包括硅胶和硅酸镁等，碱性吸附剂有氧化铝、氧化镁和聚酰胺等。酸性吸附剂适于分离碱，如脂肪胺和芳香胺。碱性吸附剂则适于分离酸性溶质，如酚、羧和吡咯衍生物等。 各种吸附剂中，最常用的吸附剂是硅胶，其次是氧化铝。 液—固色谱法 流动相必须符合下列要求： （1）能溶解样品，但不能与样品发生反应。 （2）与固定相不互溶，也不发生不可逆反应。 （3）粘度要尽可能小，这样才能有较高的渗透性和柱效。 （4）应与所用检测器相匹配。例如利用紫外检测器时，溶 剂要不吸收紫外光。 （5）容易精制、纯化、毒性小，不易着火、价格尽量便宜 等。 在液-固色谱中，选择流动相的基本原则是 极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用低极性流动相。 为了获得合适的溶剂极性，常采用两种、三种或更多种不同极性的溶剂混合起来使用，如果样品组分的分配比k值范围很广则使用梯度洗脱。 化学键合相色谱法 化学键合固定相一般都采用硅胶（薄壳型或全多孔微粒型）为基体。在键合反应之前，要对硅胶进行酸洗、中和、干燥活化等处理，然后再使硅胶表面上的硅羟基与各种有机物或有机硅化合物起反应，制备化学键合固定相。键合相可分为四种键型： （1）硅酸酯型（=Si-O-C=）键合相 将醇与硅胶表面的羟基进行酯化反应，在硅胶表面形成（=Si-O-C=）键合相。反应生成单分子层键合相。一般用极性小的溶剂洗脱，分离极性化合物。 （2）硅氮型（=Si-N=）键合相 如果用SOCl2将硅胶表面的羟基先转化成卤素（氯化），再与各种有机胺反应，可以得到各种不同极性基因的键合相。可用非极性或强极性的溶剂作为流动相。 （3）硅碳型（=Si-C=）键合相 将硅胶表面氯化后，使Si-Cl键转化为Si-C键。在这类固定相中，有机基团直接键合在硅胶表面上。 （4）硅氧烷型（=Si-O-Si-C=）键合相 将硅胶与有机氯硅烷或烷氧基硅烷反应制备。这类键合相具