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HIF-1α/BNIP3/Beclin-1 信号通路介导的自噬与孕期缺氧胎鼠肾发育障碍的机制研究 中文摘要 HIF-1α/BNIP3/Beclin-1 信号通路介导的自噬与孕期缺氧 胎鼠肾发育障碍的机制研究 中文摘要 研究背景：高血压和肾疾病的发病率及死亡率日益增加，严重威胁人类健康。长 期以来，认为遗传和生活方式在其发病中起重要作用。近年来，大量的流行病学研究 表明宫内不良环境造成胎儿的发育程序化，导致其发生高血压和肾脏疾病的风险增 加。出生体重低于 2500 克的婴儿均称为低出生体重（Low Birth Weight, LBW ）儿， 通常由早产（Preterm Birth, PB ）或宫内生长迟缓（Intrauterine Growth Retardation, IUGR ）所导致。据统计，LBW 发生率约为 7-15% 。1989 年 David Barker 教授首次提 出心血管疾病与出生体重有关，进而发展成胚胎编程学说：低出生体重（Low Birth Weight, LBW ）是心血管疾病发生的独立危险因素之一，对成年期的肾脏疾病和高血 压可产生不同的影响。PB 或 IUGR 导致的 LBW 伴发肾及肾单位发育不良，是日后 肾疾病发生的危险因素。充足的氧供对胎儿的生长发育是必需的，缺氧会影响胎儿发 育。孕期缺氧是胚胎发育中的常见现象，妊娠期母体的多种生理因素或病理因素诱发 孕妇缺氧。研究表明胎儿孕期缺氧不仅会引起胎儿宫内生长受限，造成胎儿 LBW ， 还会造成胎儿重要组织器官譬如肾的发育不良。孕期缺氧对胎儿肾发育造成怎样的病 理改变，目前国内外报道甚少。大量研究显示：成熟肾脏在病理状态下高表达的分子， 在肾脏发育过程中也高表达，而且细胞表型的改变类似于胚胎肾发育过程中后肾间充 质细胞向上皮细胞转分化的逆过程。这些研究结果提示肾脏损伤后细胞的再生过程和 肾脏胚胎发育过程有着极其密切的关系，因此，对肾发育的研究有助于理解后天性肾 脏疾病发生的病理生理机制。自噬和凋亡在胚胎、器官的发育以及组织分化过程中起 重要作用。自噬，又名 II 型细胞程序性死亡，是一个自体吞噬的过程，即：亚细胞 膜结构发生动态的形态学改变，并通过溶酶体介导蛋白质和细胞器降解的过程，主要 包括 4 个环节：底物诱导自噬前体（proautophagosome ，PAS ）的形成、自噬体 （autophagosome ）形成、自噬体与溶酶体融合和自噬体内容物被降解。LBW 患者肾 及肾单位发育落后的机制还不完全清楚。研究表明 I 型细胞程序性死亡即凋亡是LBW I 中文摘要 HIF-1 α/BNIP3/Beclin-1 信号通路介导的自噬与孕期缺氧胎鼠肾发育障碍的机制研究 患者肾及肾单位发育落后的原因之一。自噬是否也参与了这一过程国内外尚未有报 道。自噬激活过程，往往与凋亡共存或同时发生。一个突破性的研究表明凋亡抑制分 子 BCL-2 可以通过与自噬的标记物之一 Beclin-1 相互作用，进而对自噬发挥作用。 自噬在孕期缺氧大鼠肾单位发育的作用及其机制目前国内外都未见报道。因此，进一 步论证自噬与肾单位发育的关系，深入分析其分子调控机制就显得十分必要。 PI3K/Akt/mTOR 和 HIF-1α/BNIP3/Beclin-1 是细胞低氧条件下发生自噬上调的二条重 要信号通路。本课题对此二条信号通路是否参与了孕期缺氧诱导的肾发育障碍的肾细 胞的损伤进行初步的研究。为探讨孕期缺氧对胎鼠肾脏发育落后的机制，本实验利用 大鼠及大鼠肾细胞株（NRK-52E ），分别从整体、组织器官、细胞、分子水平，就孕 期缺氧诱导的自噬对胎鼠肾脏发育的影响及自噬信号通路进行了研究。 第一部分 孕期缺氧对胎鼠形态学、 血气及肾脏发育和功能的影响 目的：观察孕期缺氧对胎鼠形态学的影响，以及对肾脏发育和功能的影响。方法： 孕鼠从妊娠第 4 天至第 21 天（Gestation Day，GD4-21 ）置缺氧箱（常压低氧，O2 浓 度为 10.5%），建立LBW 动物模型。缺氧期间每天称量孕鼠饮食量及体重，