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第十章 放射自显影 第一节 放射自显影 一、定义 放射自显影是一种利用放射性核素发射的射线，使乳胶中的卤化银感光而形成影像，从而记录、检查和测量标本中放射性示踪剂的分布部位和数量的核技术。利用卤化银乳胶记录、检查和测量放射性的方法，称为放射自显影术（autoradiography or radioautography）。所得到的图像，称为放射自显影像（autoradiogram or autoradiograph）。放射自显影术和放射自显影像都简称为放射自显影（ARG）。近年发展了一种新的成像高分辨率、高灵敏度的计算机控制数字化自动放射成像分析系统，由于其使用方便、快捷自动化程度、分辨率、图像清晰度均很高，既可定位亦可定量，目前已广泛应用于核医药学、细胞与分子生物学、生物化学、药理学、基因工程学、药物代谢动力学、放射免疫及受体免疫等多方面实验研究，成为十分方便的有力工具。 （一）宏观目显影 宏观目显影又称大体自显影（macroautoradiography），观察范围较大，分辨力低，只能供肉眼或放大镜观察，或根据黑度判断示踪剂的分布及相对数量。此种自显影适用于小动物的整体标本，大动物的整个脏器或肢体, 以及层析板、免疫沉淀板、骨胳、牙齿的磨片或剖面等的研究。 （二）显微镜自显影 显微镜自显影（microscopic autoradiography）又称光学显微镜自显影（LMARG），是借助显微镜进行组织学或细胞学观察，分辨能力要求较高。根据银颗粒来判断示踪元素的分布部位和数量的多少。 （三）电子显微镜自显影 电子显微镜自显影（electron microscopic autoradiography，EMARG）用于示踪剂在亚细胞结构中分布情况的研究，能显示出普通显微镜观察不到的细微结构与放射性核素分布的关系。此类技术要求标本制成100 nm以下的超薄切片，乳胶厚度仅相当于银颗粒的直径（约140 nm）。 四、常用的感光材料 放射自显影术常用的感光材料包括各种类型的原子核乳胶、X线胶片、电影正片、氚片或幻灯片。 (一) 原子核乳胶 原子核乳胶（nuclear emulsion）简称为核乳胶，由溴化银与明胶组成。为提高对射线的敏感性，核乳胶含有较多的溴化银，与明胶之比为8:2，普通照相乳胶约为1:1。此外，还加有敏化剂。核乳胶的溴化银结晶颗粒细，单位体积内所含结晶颗粒较多，密度大。一般核乳胶的溴化银结晶颗粒直径为0.1～0.4 μm，其密度为1013颗粒／cm3。而普通X线底片乳胶的溴化银颗粒直径为0.5～3 μm，其密度仅为6×10 9颗粒／cm3。 国内生产的各种型号核乳胶，可供不同核射线的自显影用（见表10-l）。 表10-1 国产各种型号核乳胶的应用范围 核-2 核-4 HW-3 HW-4 银颗粒直径（μm） 适用范围 0.17 0．24 0.01~0.11 0.14 α粒子 所有带电粒子 所有带电粒子 （供电镜自显影用） 11 MeV以下的质子 核乳胶制品有液体核乳胶、核乳胶干板、揭膜核乳胶（即脱底乳胶膜）等类型，后两种是以液体乳胶为原料制成的。 1.液体核乳胶 液体核乳胶（liquid nuclear emulsion）常温下为乳状，较粘稠，10℃以下为胶冻状。4℃避光贮存。临用前在暗室中以40℃热水浴融化，然后在100 g乳胶中按比例和顺序，缓慢加入9.5 mL 6-甘-醇和4.2 mL的铬矾，并用玻璃棒搅拌均匀。必要时可用去离子水或双蒸水稀释。混匀的乳胶可直接涂布在标本及其支持物上。核乳胶层的厚度应根据射线性质、放射性比活度和实验要求而定，由所加入的乳胶量来调节。一般10 mL液体乳胶均匀地涂布在100 cm2面积上，干燥后厚度为50 μm。 6-甘-醇是6-硝基苯骄咪唑、甘油、乙醇的混合液。乳胶中加6甘-醇不仅可使乳胶易流布，尚可减少气泡形成和降低本底，加入硫酸铬钾（铬矾）能提高乳胶的活度，实际工作中，按1:10加入硬化剂溶液（即6-甘-醇与铬矾的混合液），配方如下： 6-硝基苯骄咪唑（1／600溶液，1:1乙醇水溶液） 3.8 mL 2％硫酸铬钾水溶液 50 mL 甘油（1:2水溶液 ） 5.3 mL 2.核乳胶干板 核乳胶干板（nuclear emulsion plate）是液体乳胶涂布于玻片上，经干燥而制成。专供宏观放射自显影和显微镜放射自显影用。根据实验要求可制备不同厚度的核乳胶干板。 3.揭膜核乳胶 揭膜核乳胶也称脱底核乳胶膜（stripping fil