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绪论 生化分离技术：生物技术下游加工过程生化物质的提取分离精制，是生物化学工程的一个重要组成部分。从发酵液或酶反应液或动植物细胞培养液中分离、纯化生物产品的过程。 生物技术下游加工过程的意义：基因工程产物，提高了产量、降低了成本。但是下游加工过程是十分艰难代价：原料稀溶液-产物高纯度高活性。 生化分离的特点：组分复杂：细胞细胞碎片、蛋白质、核酸、脂类、糖类，无机盐等 浓度低：青霉素：3.6%、庆大霉素：0.2%，胰岛素：0.001% 分离过程中容易失活：pH，离子强度、温度等变化 性质不稳定：空气氧化、微生物污染、蛋白质水解等 具经验性，均一性的相对性 下游加工过程遵循的原则：时间短、温度低、pH适中、勤清洗、消毒。 细胞分离破碎 预处理的目的： 改变发酵液的物理性质，促进从悬浮液中分离固形物的速度，实现工业规模的过滤； 尽可能使产物转入便于后处理的相中（一般是液相）； 同时除去发酵液中部分杂质。 原理：改变发酵液的胶体状态、使产物转相（一般为液相） 方法：在活性物质稳定性范围内，酸化和加热以降低发酵液的黏度； 加入絮凝剂，使细胞或溶解的大分子聚结成较大颗粒。 重力沉降：是化工过程中常用的气固、液固、液液分离的手段，在生物下游加工过程也是最基本的分离技术之一。 特点：简便易行， 缺点：细胞菌体体积小，沉降速度慢 凝聚：加入中性盐，降低双电层排斥作用。由压缩双电层机理作用，胶体脱稳引起的聚集成为凝聚。 絮凝：加入聚丙烯酸酰胺、聚乙烯亚胺，由天然高分子物质吸附架桥作用使微粒相互黏结的过程是絮凝。 作用：絮凝和凝集加快重力沉降，大大提高过滤分离单元的速度和质量。 离心沉降：分离细胞，除去或回收菌体或细胞、血球细胞、细胞器、病毒、蛋白质的分离。 （一）差速离心法 原理：采用逐渐增加离心速度或低速和高速交替进行离心，使沉降速度不同的颗粒在不同的分离速度及不同的离心时间下分批分离的方法，称为差速离心法。 常用于从组织匀浆中分离细胞和病毒。 （二）速率—区带离心 原理：不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。 介质梯度应预先形成，介质的最大密度要小于所有样品颗粒的密度。 可用来分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分 （三）等密度梯度离心 原理：当不同颗粒存在浮力密度差时，在离心力场下，在密度梯度介质中，颗粒或向下沉降，或向上浮起，一直移动到与它们各自的密度恰好相等的位置上形成区带，从而使不同浮力密度的物质得到分离。 等密度梯度离心一般常用CsCL、RuCL、蔗糖、甘油等 做介质。介质梯度不需预先制备，离心时把密度均一的介质液和样品混合后装入离心管，通过离心形成梯度，让颗粒在梯度中进行再分配。 常用来分离提取核酸、亚细胞器和质粒。 梯度回收 穿刺法 2、取代法3、虹吸法4、切割法 过滤：利用薄片形多孔性介质截留固液悬浮液中的固体粒子，进行固液分离的方法称为过滤。 悬浮液中的颗粒很细时，过滤时很容易堵死过滤介质的孔，或所形成的滤饼在过滤的压力差作用下，孔隙很小，阻力很大，使过滤困难.。 常用助滤剂： （1）硅藻土 ：由硅藻土经干燥或煅烧，粉碎、筛分而得到粒度均匀的颗粒，其中主要成分为含80～95％SiO2的硅酸 （2）珍珠岩：珍珠岩粉末在1000℃下迅速加热膨胀后，经粉碎、筛分得到粒度均匀的颗粒，其主要成分为含70％SiO2的硅酸铝 （3）石棉：石棉粉与少量硅藻土混合而成 （4）炭粉、纸浆粉等 常用的过滤设备：板框压滤机、鼓式真空压滤机 细胞破碎： 高速珠磨、压榨、高压匀浆、超声破碎、喷雾撞击破碎 化学法：酸碱、化学试剂：表面活性剂、有机溶剂、变性剂 酶法 物理方法：微波法、物理渗透法9渗透压冲击）冻融、压力释放 干燥处理：空气干燥、真空干燥、冷冻干燥、溶剂干燥 不同破碎方法的比较 第三章 初级分离 泡沫分离：根据表面吸附的原理利用通气鼓泡在液相中形成的气泡为载体对液相中的溶质或颗粒进行分离。 泡沫分馏： 分离对象：真溶液、可溶解物质、表面活性剂 金属粒子、阴离子、蛋白质、酶 条件：必须能和某类表面活性剂结合 泡沫浮选：不溶解物质 矿物浮选、粗粒浮选、微粒浮选、离子浮选、分子浮选、沉淀浮选、吸附胶体浮选 条件：必须加入捕集剂，形成难溶或不溶物，浮渣脱除 鼓泡分离：底部鼓泡，表面活性物质被气泡富集上升至塔顶。 溶媒浮选：溶液顶部与其不相容的溶剂萃取富集表面活性物质 泡沫分离的基本原