分子生物学考试大题摘要.docxVIP

1、Each allele has a different phenotype ,why(illustrate by example). 位于染色体同一位置的分别控制两种不同性状的基因是等位基因，等位基因之间具有多种关系。比如，果蝇中white位点的存在对红眼的形成是必要的。这个位点是根据无义突变命名的，该突变使果蝇在突变杂合子中具有白色的眼睛。表述野生型和突变型基因时，通常在野生型基因后面加上＋。 当等位基因存在时，一个动物可能是携带两种突变基因的杂合子。这种杂合子的表型依赖于每一个突变所遗留下的活性。从本质上讲，两个突变基因间的关系与野生型和突变型间没有区别，一个突变可能都是显性的，也可能部分是显性的。在任何一个遗传位点上并非一定要有一个野生型基因。人类学行系统的比较就提供了一个例子：缺失功能有空白型表示，即O型；但是功能性的A型和B型是共显性的，并且对O型表现出显性。 2、Conservation of exons and its application. 外显子的保守性可以做为鉴定编码区的基础，即通过确认那些在许多生物体中都存在的序列片段。对于含有这样基因的区域，即在许多生物中这些基因的功能长期被保留下来，这个序列所代表的蛋白质应当有两个特性：它必须有一个开放的阅读框（ORF）；在其它生物中很可能存在与它相关的序列。 物种杂交可作为鉴定基因的第一条标准，将来自一定区域的短片段作为探针，通过Southern杂交检测来自不同物种的相关DNA，如果我们发现几个物种中的杂交片段与某一探针相关（探针通常来源于人的DNA），则这个探针就可成为一条基因外显子的候补片段。将这些候补片段进行测序，如果它们有阅读框，则它们就可被用来分离周围的基因组区域；如果它们是一个外显子的一部分，则可以用它来鉴定整条基因，分离相应的cDNA和mRNA,从而最终分离出蛋白质。 3、Chromosome walking and its application. 从第一个重组克隆插入片段的一端分离出一个片段作为探针从文库中筛选第二个重组克隆，该克隆插入片段含有与探针重叠的顺序和染色体的其它顺序。从第二个重组克隆的插入片段再分离出末端小片段筛选第三个重组克隆，如此重复，得到一个相邻片段，等于在染色体上移了一步，称为染色体步移。 染色体步移技术是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效地获取与已知序列相邻的未知序列，即侧翼序列。主要应用有： （1）根据已知基因或分子标记连续步移，获取人、动物和植物的重要调控基因，可用于研究结构基因的表达调控； （2）步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列； （3）鉴定T-DNA或转座子的插入位点； （4）用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列； （5）用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。 4、How to clone gene for genome? （1）应用λ噬菌体载体构建基因组文库 构建基因组文库的第一步是从给体生物制备基因组DNA，并用限制酶消化法产生出适于克隆的DNA片段。然后在体外将这些DNA片段同适当的λ噬菌体连接成重组体分子，并转化到大肠杆菌的受体细胞中去。最后从转化子克隆群体中挑选出含有目的基因的克隆。 （2）应用柯斯质粒载体构建基因组文库 为了使真核基因组DNA克隆的柯斯质粒载体上，需用核酸内切限制酶Sau3A局部消化基因组DNA。然后分离收集分子量为35-45kb的片段群体，并同线性化处理的柯斯质粒载体DNA连接重组。经体外包装之后，感染大肠杆菌寄主细胞。在细胞内柯斯质粒载体按质粒特性进行复制扩增，形成基因组文库。 5、利用cDNA克隆某基因（举例） cDNA克隆的基本过程是通过一系列的酶促作用，使总poly（A）mRNA转变成双链cDNA群体，并插入到适当的载体分子上，然后再转化到大肠杆菌寄主菌株的细胞内，如此便构成了包含着所有基因编码序列的cDNA基因文库，主要步骤如下： （1）分离细胞总RNA，然后从中纯化出主要含mRNA的分部； （2）合成第一链cDNA，主要方法有oligo（dT）引导的cDNA合成法和随机引物引导的cDNA合成法； （3） 将mRNA-DNA杂交分子转变为双链cDNA分子，可采用自我引导合成法； （4）将合成的双链cDNA重组到质粒载体或噬菌体载体上，导入大肠杆菌寄主细胞增殖。重组的方式是先用末端转移酶给双链cDNA分子加尾或是将人工合成的衔接物加到双链cDNA分子的两端，然后再同经适当处理而具有相应末端的载体分子连接，将如此构成的重组体分子导入大肠杆菌寄主细胞进行扩增，便得到了所需的cDNA文库。 6、蛋白质组学研究中所用的方法及原理 蛋白质组学研究中最常用的方法是二维电泳（2DE）。二维电泳的第一维过程中，蛋白质依其等电点